血中mRNA与HBV慢加急肝衰竭预后的相关性研究(1)
【摘要】 目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)慢加急肝衰竭(ACLF)患者血中mRNA表达及意义。方法 选取20例HBV所致ACLF患者作为肝衰竭组， 20例健康体检者作为对照组， 分析比较两组临床相关指标[谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、γ谷氨酰转移酶(γ-GT)、凝血酶原活动度(PTA)、总胆红素(TBIL)、肌酐(Cr)、白细胞计数(WBC)]， 并分析HBV-ACLF患者三种微小RNA(mRNA)和临床指标[ALT、AST、白蛋白(ALB)、乙肝病毒的脱氧核糖核酸(HBV-DNA)、生存时间、PTA、凝血酶原时间的国际标准化比值(INR)、血小板(PLT)、TBIL、直接胆红素(DBIL)、乙肝核心抗体(HBcAb)]的关系。结果 肝衰竭组患者的ALT、AST、PTA、TBIL、Cr、WBC分别为(156.41±214.08)U/L、(232.59±314.12)U/L、(21.46±8.97)%、(324.60±164.76)μmol/L、(125.61±101.20)μmol/L、(8.12±5.29)×109/L， 与对照组的(26.67±
30.02)U/L、(24.22±7.60)U/L、(114.00±11.31)%、(12.83±3.25)μmol/L、(61.11±12.84)μmol/L、(5.14±
1.74)×109/L比较， 差异均具有统计学意义(P<0.05)。HBV-ACLF患者mRNA 150-5P与ALT、AST、PLT、TBIL、DBIL中度相关， 与生存时间高度相关；mRNA 146a-5P与ALT高度相关， 与AST、PTA、PLT、TBIL中度相关；mRNA 29a-3P与生存时间、PLT 、TBIL中度相关。结论 肝病病情越重， mRNA 146a-5P和mRNA 150-5P水平越低， mRNA 146a-5P和mRNA 150-5P对HBV-ACLF患者的预后评估有着重要意义， 可以作为肝衰竭新的预后判断指标。
【关键词】 乙型肝炎病毒；芯片；慢加急性肝衰竭
DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.11.031
慢加急性肝衰竭(acute on chronic liver failure， ACLF)具有起病急、并发症多、预后差的特点， 虽然近几年提倡的多学科重症监护治疗及人工肝治疗均在很大程度上提高了生存率， 但是ACLF的病死率仍然很高， 30%～50%患者会出现肝脏相关并发症， 大多数患者最终因多器官功能衰竭而死亡， 未经治疗的ACLF患者死亡率可达75%。因此对于ACLF的早诊断及早治疗是需要解决的难题[1]。mRNA是一类存在于真核生物中， 其大小长约18～25个核苷酸， 具有多种调控功能的非编码RNA， 越来越多的研究表明mRNA在肝脏的炎症反应中扮演重要角色[2]。为研究HBV导致的慢加急性肝衰竭外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells， PBMC)中mRNA的表达情况， 作者利用人类mRNA OneArray芯片找出表达水平明显改变的mRNA ， 以期探究mRNA在HBV导致的慢加急性肝衰竭中表达情况， 并初步分析其临床意义及应用价值。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 选取2014年8月～2016年8月大连市第六人民医院20例HBV所致ACLF患者作为肝衰竭组， 诊断均符合中华医学会肝病学分会《肝衰竭诊治指南(2012年版》[2]诊疗标准。肝衰竭组中男8例， 女12例， 平均年龄(45.07±8.14)岁。另选20例健康体检者作为对照组， 男11例， 女9例， 平均年龄(33.30±8.34)岁。两组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)， 具有可比性。
1. 2 實验方法 以Trizol法(淋巴细胞分离液购自天津灏洋生物科技有限公司， RNAiso Plus 购自TaKaRa公司)提取外周血RNA ， 通过荧光实时定量RT-PCR检测方法(反转录-荧光定量PCR引物由上海卓立技术科技公司合成)[3]， 分别检测两组的筛选mRNA定量。美国Beckman全自动生物化学分析仪检测生物化学指标， 采用STA-revolution(全自动血凝仪)及配套试剂盒检测凝血功能。分析比较两组患者的临床相关指标(ALT、AST、γ-GT、PTA、TBIL、Cr、WBC)， 并分析HBV-ACLF患者三种mRNA和临床指标(ALT、AST、ALB、HBV-DNA、生存时间、PTA、INR、PLT、TBIL、DBIL、HBcAb)的关系。
1. 3 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差( x-±s)表示， 采用t检验；计数资料以率(%)表示， 采用χ2检验。相关性分析采用Pearson分析， Pearson相关系数的绝对值 (|r|)>0.8 为高度相关， |r|>0.5为中度相关， |r|>0.3为低度相关。P<0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果
2. 1 两组的临床相关指标比较 肝衰竭组患者的ALT、AST、PTA、TBIL、Cr、WBC水平与对照组比较， 差异均具有统计学意义(P<0.05)；肝衰竭组患者的γ-GT与对照组比较， 差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。
2. 2 HBV-ACLF患者三种mRNA和临床指标的相关系分析 HBV-ACLF患者mRNA 150-5P与ALT、AST、PLT、TBIL、DBIL中度相关， 与生存时间高度相关；mRNA 146a-5P与ALT高度相关， 与AST、PTA、PLT、TBIL中度相关；mRNA 29a-3P与生存时间、PLT 、TBIL中度相关。见表2。, http://www.100md.com(马大鹏 吴锋 梁恩富)
30.02)U/L、(24.22±7.60)U/L、(114.00±11.31)%、(12.83±3.25)μmol/L、(61.11±12.84)μmol/L、(5.14±
1.74)×109/L比较， 差异均具有统计学意义(P<0.05)。HBV-ACLF患者mRNA 150-5P与ALT、AST、PLT、TBIL、DBIL中度相关， 与生存时间高度相关；mRNA 146a-5P与ALT高度相关， 与AST、PTA、PLT、TBIL中度相关；mRNA 29a-3P与生存时间、PLT 、TBIL中度相关。结论 肝病病情越重， mRNA 146a-5P和mRNA 150-5P水平越低， mRNA 146a-5P和mRNA 150-5P对HBV-ACLF患者的预后评估有着重要意义， 可以作为肝衰竭新的预后判断指标。
【关键词】 乙型肝炎病毒；芯片；慢加急性肝衰竭
DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.11.031
慢加急性肝衰竭(acute on chronic liver failure， ACLF)具有起病急、并发症多、预后差的特点， 虽然近几年提倡的多学科重症监护治疗及人工肝治疗均在很大程度上提高了生存率， 但是ACLF的病死率仍然很高， 30%～50%患者会出现肝脏相关并发症， 大多数患者最终因多器官功能衰竭而死亡， 未经治疗的ACLF患者死亡率可达75%。因此对于ACLF的早诊断及早治疗是需要解决的难题[1]。mRNA是一类存在于真核生物中， 其大小长约18～25个核苷酸， 具有多种调控功能的非编码RNA， 越来越多的研究表明mRNA在肝脏的炎症反应中扮演重要角色[2]。为研究HBV导致的慢加急性肝衰竭外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells， PBMC)中mRNA的表达情况， 作者利用人类mRNA OneArray芯片找出表达水平明显改变的mRNA ， 以期探究mRNA在HBV导致的慢加急性肝衰竭中表达情况， 并初步分析其临床意义及应用价值。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 选取2014年8月～2016年8月大连市第六人民医院20例HBV所致ACLF患者作为肝衰竭组， 诊断均符合中华医学会肝病学分会《肝衰竭诊治指南(2012年版》[2]诊疗标准。肝衰竭组中男8例， 女12例， 平均年龄(45.07±8.14)岁。另选20例健康体检者作为对照组， 男11例， 女9例， 平均年龄(33.30±8.34)岁。两组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)， 具有可比性。
1. 2 實验方法 以Trizol法(淋巴细胞分离液购自天津灏洋生物科技有限公司， RNAiso Plus 购自TaKaRa公司)提取外周血RNA ， 通过荧光实时定量RT-PCR检测方法(反转录-荧光定量PCR引物由上海卓立技术科技公司合成)[3]， 分别检测两组的筛选mRNA定量。美国Beckman全自动生物化学分析仪检测生物化学指标， 采用STA-revolution(全自动血凝仪)及配套试剂盒检测凝血功能。分析比较两组患者的临床相关指标(ALT、AST、γ-GT、PTA、TBIL、Cr、WBC)， 并分析HBV-ACLF患者三种mRNA和临床指标(ALT、AST、ALB、HBV-DNA、生存时间、PTA、INR、PLT、TBIL、DBIL、HBcAb)的关系。
1. 3 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差( x-±s)表示， 采用t检验；计数资料以率(%)表示， 采用χ2检验。相关性分析采用Pearson分析， Pearson相关系数的绝对值 (|r|)>0.8 为高度相关， |r|>0.5为中度相关， |r|>0.3为低度相关。P<0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果
2. 1 两组的临床相关指标比较 肝衰竭组患者的ALT、AST、PTA、TBIL、Cr、WBC水平与对照组比较， 差异均具有统计学意义(P<0.05)；肝衰竭组患者的γ-GT与对照组比较， 差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。
2. 2 HBV-ACLF患者三种mRNA和临床指标的相关系分析 HBV-ACLF患者mRNA 150-5P与ALT、AST、PLT、TBIL、DBIL中度相关， 与生存时间高度相关；mRNA 146a-5P与ALT高度相关， 与AST、PTA、PLT、TBIL中度相关；mRNA 29a-3P与生存时间、PLT 、TBIL中度相关。见表2。, http://www.100md.com(马大鹏 吴锋 梁恩富)