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肾综合征出血热患者发热期淋巴细胞亚群和病毒载量的研究(2)
http://www.100md.com 2017年10月5日 《中国实用医药》 2017年第28期
     1. 2 仪器和主要试剂 罗氏公司Cobas480型PCR扩增仪;上海之江生物有限公司提供病毒核糖核酸提取和荧光PCR扩增试剂盒。汉坦病毒IgM和IgG抗体试剂盒由厦门波生生物技术有限公司提供。美国BECKMAN COUITER FC 500型流式细胞仪及其配套试剂。其他常用试剂为国产厂家提供。

    1. 3 汉坦病毒抗体检测、核酸提取和病毒载量测定 采用胶体金法测定血清汉坦病毒IgM抗体, 具体操作步骤按厂家提供的说明书进行。病毒核糖核酸提取按照上海之江公司提供试剂盒的说明书操作, 然后保存于-80℃备用。病毒载量测定根据数据库中汉坦病毒M14627序列设计引物, 参照上海之江公司提供试剂盒的说明书进行改良。

    1. 4 淋巴细胞亚群的测定 淋巴细胞亚群的测定步骤:①取4支流式检测专用小试管, 标号, 加抗体和样本染色: 45-4-8-3抗体4 ?l, 3-16-56抗体8 ?l, 19-3DR抗体4 ?l和8 ?l,4-25抗体8 ?l。②加颠倒混匀全血40 ?l, 振荡混匀, 避光20 min。③加溶血素200 ?l, 振荡混匀, 避光10 min ......
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