中药对类风湿关节炎滑膜细胞增殖与凋亡的研究(1)
【关键词】 类风湿关节炎；中药；滑膜细胞；增殖；凋亡
DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.34.110
类风湿关节炎(rheumatioid arthritis， RA)是一种以关节滑膜慢性炎症病变为主的全身性自身免疫性疾病， 其最具有特征性的病理改变是滑膜炎和血管翳的形成， 具有类似于“局部恶性肿瘤”的增生性和破坏性的特点[1]， 导致关节结构破坏、畸形及功能丧失。我国患病人群约占0.32%～0.36%， 该病5～10年的致残率为60%， 是造成我国人民残疾和丧失劳动力的主要疾病之一。因此抑制滑膜细胞增殖、诱导滑膜细胞凋亡成为治疗类风湿关节炎的主要策略之一。
1 单味中药的研究
1. 1 白芍总苷(TGP) 白芍总苷是从白芍中提取的一组糖苷类物质， 具有抗炎镇痛、免疫调节、保肝等作用， 能从多途径抑制自身免疫反应， 临床上用来治疗类风湿关节炎、强直性脊柱炎、系统性红斑狼疮、幼年特发性关节炎等。
贾晓益等[2]研究白芍总苷对胶原性关节炎(collagen induced arthritis， CIA)滑膜组织中Bcl-2、Bax基因表达的影响。将SD大鼠随机分成正常组、模型组和白芍总苷大、小剂量组四组；采用鸡Ⅱ型胶原皮内注射诱导大鼠胶原性关节炎模型；运用免疫组织化学法观察Bcl-2、Bax参与胶原性关节炎的发病过程。结果显示白芍总苷可下调滑膜组织中Bcl-2表达；上调Bax表达及降低Bcl-2/Bax的比值。Bax、肿瘤坏死因子等诱导凋亡， 而Bcl-2、p53等抑制凋亡的发生， 推测白芍总苷通过调控促凋亡基因及抑凋亡基因的表达， 以促进滑膜细胞凋亡， 并认为这可能是其治疗胶原性关节炎的机制之一。
1. 2 雷公藤多苷(TWP) 雷公藤又名三棱花、黄藤根、断肠草等， 功用舒经活血、祛风除湿、消肿解毒止痛。雷公藤多苷是从卫茅科雷公藤属双子叶植物中提取的多苷类物质， 具有止痛消炎、抑制免疫等作用， 对类风湿关节炎具有良好的疗效。
胡永红等[3]观察雷公藤甲素(triptolide)对胶原性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的影响， 选用Wistar大鼠造模， 流式细胞仪结果显示正常组、模型组、雷公藤组的凋亡细胞分别为(0.87±0.24)%、(1.83±0.82)%和(3.98±1.16)%。三组S期细胞分别为(3.4±0.7)%、(8.0±1.4)%和(3.3±1.20)%。缺口末端标记法(TUNEL)标记结果显示三组凋亡细胞分别为(1.0±0.4)%、(2.2±1.0)%和(4.5±0.9)%。雷公藤组与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。本实验首次阐明雷公藤甲素可诱导胶原性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡。
1. 3 青藤碱(SN) 青藤碱是从中药青风藤中提取的單体生物碱， 对自身免疫性疾病有较好的治疗效果， 尤其在治疗类风湿关节炎方面具有较明确的疗效， 具有抗炎止痛、免疫抑制、镇静、降压等作用。
陈光星等[4]通过动物实验表明青藤碱可通过下调p53基因表达来诱导细胞凋亡、抑制滑膜细胞增生， 改善佐剂性关节炎(AA)大鼠的关节炎症。张莹等[5]研究表明青藤碱在一定浓度及作用时间内可抑制类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖， 诱导凋亡。这可能是青藤碱治疗类风湿关节炎机制之一。
1. 4 昆明山海棠 昆明山海棠又称六方藤、紫金藤、火把花等， 为卫茅科雷公藤属植物， 具有抗肿瘤、解毒抗炎等作用， 临床上治疗类风湿关节炎已被证实有确切疗效。
曾润铭等[6]研究昆明山海棠对类风湿关节炎滑膜细胞体外增殖和凋亡的影响。取6例类风湿关节炎患者滑膜组织， 3例正常滑膜组织， 通过消化法获得原代类风湿关节炎滑膜细胞及正常滑膜细胞， 第2～4代细胞用免疫磁珠法筛选滑膜CD68+细胞和CD68-细胞， 72 h后加入昆明山海棠药液， 结果显示昆明山海棠对类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞和巨噬样细胞有明显抑制异常增生和诱导凋亡的作用。
1. 5 白藜芦醇(Res) 白藜芦醇是一种多酚类化合物， 主要存在于果类和虎杖等多种植物中。白藜芦醇是植物在真菌感染、紫外线照射、机械损伤等不利条件下产生的“植物补体”， 能保护植物， 具有抑制血小板聚集、抗血栓、抗炎、抗脂质过氧化等作用。中医常用虎杖根(主要成分为白藜芦醇)来治疗各类关节炎， 取得良好疗效。近年来发现白藜芦醇可通过诱导肿瘤细胞凋亡而起抗癌作用。
唐玲丽等[7]用不同浓度白藜芦醇处理体外培养的类风湿关节炎滑膜细胞24 h， caspase-3酶原的表达随药物浓度的增加而减少。白藜芦醇在体外抑制类风湿关节炎滑膜细胞增殖， 诱导细胞凋亡， 可能与caspase-3酶原的活化有关。
1. 6 黄芪多糖 黄芪多糖是黄芪中含量最多、免疫活性较强的一类物质， 是黄芪的主要活性成分。近年来对黄芪的药理作用研究甚多， 具有增强机体的免疫机能， 并具有抗肿瘤作用。
李洪全等[8]研究黄芪杂多糖(AHPS)对佐剂性关节炎大鼠促炎因子分泌及关节滑膜细胞凋亡的调节作用。黄芪杂多糖和雷公藤多苷均可使佐剂性关节炎大鼠的膝关节滑膜细胞凋亡数目升高明显， 显著下调佐剂性关节炎大鼠膝关节滑膜Bcl-2的阳性表达和上调Bax的阳性表达。
2 复方中药的研究
2. 1 桂枝芍药知母汤 桂枝芍药知母汤最早记载于张仲景《金贵要略·中风历节病脉证并治第五》， 是历代医家广泛应用治疗痹证的主要方剂。
余阗等[9]以“桂枝芍药知母汤浓缩液”为干预药物研究其对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡、增殖的影响， 实验结果显示实验组的作用均优于对照组， 差异具有统计学意义(P<0.05)， 实验组Fas抗原表达上调， 细胞凋亡增加；p53蛋白、Bcl-2蛋白表达下调， 为桂枝芍药知母汤在临床上治疗类风湿关节炎提供了实验依据。, 百拇医药(马华 刁永红)
DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.34.110
类风湿关节炎(rheumatioid arthritis， RA)是一种以关节滑膜慢性炎症病变为主的全身性自身免疫性疾病， 其最具有特征性的病理改变是滑膜炎和血管翳的形成， 具有类似于“局部恶性肿瘤”的增生性和破坏性的特点[1]， 导致关节结构破坏、畸形及功能丧失。我国患病人群约占0.32%～0.36%， 该病5～10年的致残率为60%， 是造成我国人民残疾和丧失劳动力的主要疾病之一。因此抑制滑膜细胞增殖、诱导滑膜细胞凋亡成为治疗类风湿关节炎的主要策略之一。
1 单味中药的研究
1. 1 白芍总苷(TGP) 白芍总苷是从白芍中提取的一组糖苷类物质， 具有抗炎镇痛、免疫调节、保肝等作用， 能从多途径抑制自身免疫反应， 临床上用来治疗类风湿关节炎、强直性脊柱炎、系统性红斑狼疮、幼年特发性关节炎等。
贾晓益等[2]研究白芍总苷对胶原性关节炎(collagen induced arthritis， CIA)滑膜组织中Bcl-2、Bax基因表达的影响。将SD大鼠随机分成正常组、模型组和白芍总苷大、小剂量组四组；采用鸡Ⅱ型胶原皮内注射诱导大鼠胶原性关节炎模型；运用免疫组织化学法观察Bcl-2、Bax参与胶原性关节炎的发病过程。结果显示白芍总苷可下调滑膜组织中Bcl-2表达；上调Bax表达及降低Bcl-2/Bax的比值。Bax、肿瘤坏死因子等诱导凋亡， 而Bcl-2、p53等抑制凋亡的发生， 推测白芍总苷通过调控促凋亡基因及抑凋亡基因的表达， 以促进滑膜细胞凋亡， 并认为这可能是其治疗胶原性关节炎的机制之一。
1. 2 雷公藤多苷(TWP) 雷公藤又名三棱花、黄藤根、断肠草等， 功用舒经活血、祛风除湿、消肿解毒止痛。雷公藤多苷是从卫茅科雷公藤属双子叶植物中提取的多苷类物质， 具有止痛消炎、抑制免疫等作用， 对类风湿关节炎具有良好的疗效。
胡永红等[3]观察雷公藤甲素(triptolide)对胶原性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的影响， 选用Wistar大鼠造模， 流式细胞仪结果显示正常组、模型组、雷公藤组的凋亡细胞分别为(0.87±0.24)%、(1.83±0.82)%和(3.98±1.16)%。三组S期细胞分别为(3.4±0.7)%、(8.0±1.4)%和(3.3±1.20)%。缺口末端标记法(TUNEL)标记结果显示三组凋亡细胞分别为(1.0±0.4)%、(2.2±1.0)%和(4.5±0.9)%。雷公藤组与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。本实验首次阐明雷公藤甲素可诱导胶原性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡。
1. 3 青藤碱(SN) 青藤碱是从中药青风藤中提取的單体生物碱， 对自身免疫性疾病有较好的治疗效果， 尤其在治疗类风湿关节炎方面具有较明确的疗效， 具有抗炎止痛、免疫抑制、镇静、降压等作用。
陈光星等[4]通过动物实验表明青藤碱可通过下调p53基因表达来诱导细胞凋亡、抑制滑膜细胞增生， 改善佐剂性关节炎(AA)大鼠的关节炎症。张莹等[5]研究表明青藤碱在一定浓度及作用时间内可抑制类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖， 诱导凋亡。这可能是青藤碱治疗类风湿关节炎机制之一。
1. 4 昆明山海棠 昆明山海棠又称六方藤、紫金藤、火把花等， 为卫茅科雷公藤属植物， 具有抗肿瘤、解毒抗炎等作用， 临床上治疗类风湿关节炎已被证实有确切疗效。
曾润铭等[6]研究昆明山海棠对类风湿关节炎滑膜细胞体外增殖和凋亡的影响。取6例类风湿关节炎患者滑膜组织， 3例正常滑膜组织， 通过消化法获得原代类风湿关节炎滑膜细胞及正常滑膜细胞， 第2～4代细胞用免疫磁珠法筛选滑膜CD68+细胞和CD68-细胞， 72 h后加入昆明山海棠药液， 结果显示昆明山海棠对类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞和巨噬样细胞有明显抑制异常增生和诱导凋亡的作用。
1. 5 白藜芦醇(Res) 白藜芦醇是一种多酚类化合物， 主要存在于果类和虎杖等多种植物中。白藜芦醇是植物在真菌感染、紫外线照射、机械损伤等不利条件下产生的“植物补体”， 能保护植物， 具有抑制血小板聚集、抗血栓、抗炎、抗脂质过氧化等作用。中医常用虎杖根(主要成分为白藜芦醇)来治疗各类关节炎， 取得良好疗效。近年来发现白藜芦醇可通过诱导肿瘤细胞凋亡而起抗癌作用。
唐玲丽等[7]用不同浓度白藜芦醇处理体外培养的类风湿关节炎滑膜细胞24 h， caspase-3酶原的表达随药物浓度的增加而减少。白藜芦醇在体外抑制类风湿关节炎滑膜细胞增殖， 诱导细胞凋亡， 可能与caspase-3酶原的活化有关。
1. 6 黄芪多糖 黄芪多糖是黄芪中含量最多、免疫活性较强的一类物质， 是黄芪的主要活性成分。近年来对黄芪的药理作用研究甚多， 具有增强机体的免疫机能， 并具有抗肿瘤作用。
李洪全等[8]研究黄芪杂多糖(AHPS)对佐剂性关节炎大鼠促炎因子分泌及关节滑膜细胞凋亡的调节作用。黄芪杂多糖和雷公藤多苷均可使佐剂性关节炎大鼠的膝关节滑膜细胞凋亡数目升高明显， 显著下调佐剂性关节炎大鼠膝关节滑膜Bcl-2的阳性表达和上调Bax的阳性表达。
2 复方中药的研究
2. 1 桂枝芍药知母汤 桂枝芍药知母汤最早记载于张仲景《金贵要略·中风历节病脉证并治第五》， 是历代医家广泛应用治疗痹证的主要方剂。
余阗等[9]以“桂枝芍药知母汤浓缩液”为干预药物研究其对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡、增殖的影响， 实验结果显示实验组的作用均优于对照组， 差异具有统计学意义(P<0.05)， 实验组Fas抗原表达上调， 细胞凋亡增加；p53蛋白、Bcl-2蛋白表达下调， 为桂枝芍药知母汤在临床上治疗类风湿关节炎提供了实验依据。, 百拇医药(马华 刁永红)