王烈宏

    子宫内膜癌是临床常见的恶性肿瘤之一, 是影响女性健康的重大疾病之一[1]。近些年, 对于子宫内膜癌的研究仍在不断深入, 子宫内膜癌的发病机制以及肿瘤的诱导因子成为了研究该病的关键之处[2]。CD105是一种是内皮细胞增生的最可靠的标志物[3,4]。它在癌灶内及癌灶瘤周高表达, 提示其在新血管生成的血管优先表达[5]。子宫内膜癌新生的血管上强烈的表达, 因此常作为判断肿瘤产生的一种特殊的标志物质[6]。HIF-1α是一种转录因子, 在细胞缺氧时产生。研究显示, 在一些恶性肿瘤以及组织癌变前过度表达, 并且该因子与肿瘤的转移, 能量的代谢密切相关。本文通过SP法对相应的抗原作为标记物标志物进行标记, 研究高原环境中CD105,F-8RAg和HIF-1α在子宫内膜中的表达, 并对其价值进行评价。

    1 资料与方法

    1. 1 一般资料 选取本院2015年7月～到2016年9月收治的子宫内膜癌患者48例作为子宫内膜癌组, 根据临床手术病理分期标准[7], 患者中子宫内膜癌Ⅰ期22例, Ⅱ期14例,Ⅲ期7例, Ⅳ期5例。另选本院同期收治的子宫内膜不典型性增生11例(不典型性增生组)和正常子宫内膜患者12例(正常组)。所有研究对象的标本均经过病理学诊断确诊。

    1. 2 检测方法 本次研究检测方法采用SP法, 所需的SP法试剂盒由北京中山公司提供, CD105、F-8RAg以及HIF-1α抗体由广州安必平医药科技股份有限公司提供, 具体操作按照步骤：①烤片：温度68℃, 时间20 min；②常规二甲苯脱蜡, 采用梯度酒精脱水法：二甲苯Ⅰ(20min)-二甲苯Ⅱ(20 min)-100%酒精Ⅰ(10 min)-100%酒精Ⅱ(10 min)-95%酒精(5 min)-80%酒精(5 min)-70%酒精(5 min)；③阻断：灭活内源性过氧化物酶：3%过氧化氢(H2O2)37℃, 孵育10 min,磷酸缓冲盐溶液(PBS)冲洗3次, 5 min/次；④抗原修复：在pH 6.0的0.01M枸橼酸缓冲液中煮沸, 温度95℃, 时间15～20 min, 然后自然冷却20 min 以上, 再用冷水冲洗, 加快冷却至室温, PBS冲洗3次, 5 min/次；⑤健康羊血清工作液封闭：温度37℃, 时间10 min, 倾去勿洗；⑥滴加一抗：4℃冰箱孵育过夜, PBS冲洗3次, 5 min/次(用PBS代替一抗作阴性对照), 滴加生物素标记二抗,在 37℃温度下孵育30 min,PBS冲洗3次, 5 min/次；⑦滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液：在37℃温度下, 孵育30 min, PBS冲洗3次,5 min/次；⑧二氨基联苯胺(DAB)/ H2O2反应染色：清水充分冲洗后, 用苏木素复染, 常规脱水、透明、干燥、封片 ......