移去盖玻片， 放入酸性 DNA 变性液中， 室温孵育7 min。取出玻片浸泡于裂解液中20 min。在蒸馏水中5 min洗去残余裂解液。 玻片依次放入70%、90%和100% 乙醇中各2 min 脱水。晾干后玻片用瑞氏染色液覆盖于样本表面10 min。用自来水冲洗掉染液， 风干。 200倍光镜下观察， 比较精子核和核周围晕环大小， 计算精子DNA 碎片指数。

    1. 2. 2 精子核蛋白组型检测(苯胺蓝染色法)

    1. 2. 2. 1 实验原理 在精子发生成熟过程中， 与精子核 DNA 结合的碱性蛋白发生组型转换， 富含赖氨酸残基的组蛋白逐渐被富含精氨酸和胱氨酸残基的鱼精蛋白所替代。 在酸性条件下， 苯胺蓝与赖氨酸残基结合生成蓝色化合物， 从而显示富含赖氨酸残基蛋白质的存在。

    1. 2. 2. 2 精子核蛋白组型转换检测 精子核蛋白组型转换采用苯胺蓝染色法(试剂盒购自深圳华康生物医学工程有限公司)分析精子核蛋白成熟度， 操作步骤详见试剂盒说明书。正常参考值为核蛋白组型转换异常率<30%。

    1. 3 观察指标 比较不同精子核蛋白组型转换异常率间的精子数及DFI ......