稽留流产组织的染色体检测研究分析(1)
【摘要】 目的 研究分析稽留流产组织的染色体检测。方法 60例稽留流产孕妇， 均接受流产胎儿组织及绒毛组织染色体拷贝数变异测序(CNV-sep)检测， 分析检测结果， 依据结果分为染色体正常组和染色体异常组， 对两组孕妇年龄、胎儿性别进行统计比较。结果 60例孕妇稽留流产组织(流产绒毛标本55例， 流产胎儿标本5例)中， CNV-sep技术检测染色体异常31例， 异常检出率为51.7%。流产绒毛标本55例中， 获取CNV-sep技术检测结果55例， 检测成功率为100.0%， 染色体正常25例， 占45.5%， 其中染色体核型46， XY 11例(44.0%)， 46， XX 14例(56.0%);染色体异常30例， 占54.5%， 其中染色体单体异常3例(10.0%)， 均为性染色体单体。染色体三体型异常19例(63.3%)， 包括13-三体2例(10.5%)， 16-三体6例(31.6%)， 18-三体4例(21.1%)， 21-三体1例(5.3%)， 22-三体6例(31.6%)。性染色体三体型2例(6.7%)， 包括XXY 1例(50.0%)， XXX 1例(50.0%)。染色体多倍体6例(20.0%)， 包括三倍体5例(83.3%)， 四倍体1例(16.7%)。流产胎儿标本5例中， 获取CNV-sep技术检测结果5例， 检测成功率为100.0%， 染色体正常4例， 占80.0%， 其中染色体核型46， XY 2例(50.0%)， 46， XX 2例(50.0%);染色体异常1例， 占20.0%， 为18-三体。染色体正常组孕妇的年龄(32.6±5.0)岁和染色体异常组的(31.7±5.9)岁比较， 差异无统计学意义(P>0.05)。两组胎儿性别比较， 差异无统计学意义(P>0.05)。结论 稽留流产组织的染色体检测能够将有效依据提供给临床了解流产原因， 进而指导下一次受孕。
【关键词】 稽留流产;流产胎儿组织;流产绒毛组织;染色体CNV-sep检测
DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.24.089
自然流产在妇产科较为常见， 10%～15%的妊娠会自然流产[1]， 环境因素、胎盘因素、胚胎因素、母体因素等很多因素均对其发生造成了影响， 其中主要影响因素为胚胎染色体异常[2]。稽留流产属于一種特殊的自然流产， 又称过期流产， 指没有及时排出宫内胚胎或胎儿， 目前， 临床还没有明确其病因[3]。检测流产组织染色体， 对胚胎停育、流产原因进行分析一方面能够将理论依据提供给临床咨询， 另一方面还能够指导孕妇再次妊娠[4]。现阶段， 在医学诊断的各个领域， CNV-sep技术均已经得到了广泛应用[5]。本文研究分析了稽留流产组织的染色体检测。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 回顾性分析2017年1月～2020年1月本院收治的60例稽留流产孕妇的临床资料， 年龄26～41岁， 平均年龄(33.5±5.4)岁;停经时间8～14周， 平均停经时间(11.2±2.4)周。
1. 2 纳入及排除标准 纳入标准：均接受清宫术治疗;均符合稽留流产的诊断标准[6];均知情同意。排除标准：缺乏齐全的病历资料;缺乏良好的依从性;缺乏清晰的意识。
1. 3 方法
1. 3. 1 样本制备 术中严格无菌操作， 从宫腔中取胎儿腓肠肌组织或绒毛组织， 放置在含肝素生理盐水的无菌容器中， 显微镜下取5 mg左右的组织， 用无菌剪刀剪碎， 加入5 ml 的0.075 mol/L氯化钾溶液， 在37℃的温度下低渗20 min， 用固定液(甲醇：冰乙酸)预固定， 离心， 弃上清， 连续固定2次， 10 min/次， 再次弃上清， 加入1 ml醋酸， 消化1 min， 最后用3 ml甲醇终止消化。
1. 3. 2 CNV-sep检测 应用TaqMan探针对流产胎儿组织及绒毛组织进行检测， 将黄豆大小流产组织取出， 在微型离心管(EP管)中放置， 密闭保存。不冷冻， 在4℃的温度下保存、运输， 2 d内向实验室输送处理， 步骤为组织和DNA-EZ-GALO法DNA建库-Hiseq 2500测序-RUPA比对法生物信息学分析。
1. 4 观察指标及判定标准 随机计数流产胎儿组织及绒毛组织细胞100个及以上， 正常样本的标准为正常细胞占总数的90%以上， 异常样本的标准为异常细胞占总数的60%以上。在无法判断的情况下将计数扩大。依据结果将孕妇分为染色体正常组和染色体异常组， 比较两组孕妇年龄、胎儿性别。
1. 5 统计学方法 采用SPSS21.0统计学软件处理数据。计量资料以均数±标准差( x-±s)表示， 采用t检验;计数资料以率(%)表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2. 1 60例孕妇稽留流产组织CNV-sep技术检测结果分析 60例孕妇稽留流产组织(流产绒毛标本55例， 流产胎儿标本5例)中， CNV-sep技术检测染色体异常31例， 异常检出率为51.7%。流产绒毛标本55例中， 获取CNV-sep技术检测结果55例， 检测成功率为100.0%。染色体正常25例， 占45.5%， 其中染色体核型46， XY 11例(44.0%);46， XX 14例(56.0%)。染色体异常30例， 占54.5%， 其中染色体单体异常3例(10.0%)， 均为性染色体单体。染色体三体型异常19例(63.3%)， 包括13-三体2例(10.5%)， 16-三体6例(31.6%)， 18-三体4例(21.1%)， 21-三体1例(5.3%)， 22-三体6例(31.6%)。性染色体三体型2例(6.7%)， 包括XXY 1例(50.0%)， XXX 1例(50.0%)。染色体多倍体6例(20.0%)， 包括三倍体5例(83.3%)， 四倍体1例(16.7%)。流产胎儿标本5例中， 获取CNV-sep技术检测结果5例， 检测成功率为100.0%， 染色体正常4例， 占80.0%， 其中染色体核型46， XY 2例(50.0%)， 46， XX 2例(50.0%);染色体异常1例， 占20.0%， 为18-三体。, http://www.100md.com(赵艳辉)
【关键词】 稽留流产;流产胎儿组织;流产绒毛组织;染色体CNV-sep检测
DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.24.089
自然流产在妇产科较为常见， 10%～15%的妊娠会自然流产[1]， 环境因素、胎盘因素、胚胎因素、母体因素等很多因素均对其发生造成了影响， 其中主要影响因素为胚胎染色体异常[2]。稽留流产属于一種特殊的自然流产， 又称过期流产， 指没有及时排出宫内胚胎或胎儿， 目前， 临床还没有明确其病因[3]。检测流产组织染色体， 对胚胎停育、流产原因进行分析一方面能够将理论依据提供给临床咨询， 另一方面还能够指导孕妇再次妊娠[4]。现阶段， 在医学诊断的各个领域， CNV-sep技术均已经得到了广泛应用[5]。本文研究分析了稽留流产组织的染色体检测。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 回顾性分析2017年1月～2020年1月本院收治的60例稽留流产孕妇的临床资料， 年龄26～41岁， 平均年龄(33.5±5.4)岁;停经时间8～14周， 平均停经时间(11.2±2.4)周。
1. 2 纳入及排除标准 纳入标准：均接受清宫术治疗;均符合稽留流产的诊断标准[6];均知情同意。排除标准：缺乏齐全的病历资料;缺乏良好的依从性;缺乏清晰的意识。
1. 3 方法
1. 3. 1 样本制备 术中严格无菌操作， 从宫腔中取胎儿腓肠肌组织或绒毛组织， 放置在含肝素生理盐水的无菌容器中， 显微镜下取5 mg左右的组织， 用无菌剪刀剪碎， 加入5 ml 的0.075 mol/L氯化钾溶液， 在37℃的温度下低渗20 min， 用固定液(甲醇：冰乙酸)预固定， 离心， 弃上清， 连续固定2次， 10 min/次， 再次弃上清， 加入1 ml醋酸， 消化1 min， 最后用3 ml甲醇终止消化。
1. 3. 2 CNV-sep检测 应用TaqMan探针对流产胎儿组织及绒毛组织进行检测， 将黄豆大小流产组织取出， 在微型离心管(EP管)中放置， 密闭保存。不冷冻， 在4℃的温度下保存、运输， 2 d内向实验室输送处理， 步骤为组织和DNA-EZ-GALO法DNA建库-Hiseq 2500测序-RUPA比对法生物信息学分析。
1. 4 观察指标及判定标准 随机计数流产胎儿组织及绒毛组织细胞100个及以上， 正常样本的标准为正常细胞占总数的90%以上， 异常样本的标准为异常细胞占总数的60%以上。在无法判断的情况下将计数扩大。依据结果将孕妇分为染色体正常组和染色体异常组， 比较两组孕妇年龄、胎儿性别。
1. 5 统计学方法 采用SPSS21.0统计学软件处理数据。计量资料以均数±标准差( x-±s)表示， 采用t检验;计数资料以率(%)表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2. 1 60例孕妇稽留流产组织CNV-sep技术检测结果分析 60例孕妇稽留流产组织(流产绒毛标本55例， 流产胎儿标本5例)中， CNV-sep技术检测染色体异常31例， 异常检出率为51.7%。流产绒毛标本55例中， 获取CNV-sep技术检测结果55例， 检测成功率为100.0%。染色体正常25例， 占45.5%， 其中染色体核型46， XY 11例(44.0%);46， XX 14例(56.0%)。染色体异常30例， 占54.5%， 其中染色体单体异常3例(10.0%)， 均为性染色体单体。染色体三体型异常19例(63.3%)， 包括13-三体2例(10.5%)， 16-三体6例(31.6%)， 18-三体4例(21.1%)， 21-三体1例(5.3%)， 22-三体6例(31.6%)。性染色体三体型2例(6.7%)， 包括XXY 1例(50.0%)， XXX 1例(50.0%)。染色体多倍体6例(20.0%)， 包括三倍体5例(83.3%)， 四倍体1例(16.7%)。流产胎儿标本5例中， 获取CNV-sep技术检测结果5例， 检测成功率为100.0%， 染色体正常4例， 占80.0%， 其中染色体核型46， XY 2例(50.0%)， 46， XX 2例(50.0%);染色体异常1例， 占20.0%， 为18-三体。, http://www.100md.com(赵艳辉)