寇鑫晖 赵恒侠 陈军 李惠林

    糖尿病大血管病变是发生于主动脉、冠状动脉、脑基底动脉和肾动脉等处的动脉粥样(AS)硬化性疾病,糖尿病显著增加大血管并发症的发生率[1]。正常生理状态下,血管内皮细胞处于静息状态,内皮细胞仅在周围细胞正常凋亡后短暂进入增殖状态；而糖尿病病理状态下,由于血液中ox-LDL 的刺激使得内皮细胞异常活化,并持续进入病理性增殖状态,导致内皮功能紊乱[2]。血管内皮细胞活化和功能紊乱是AS 硬化性疾病的始动因素,过度的内皮细胞增殖是血管重构的一个重要因素[3]。如何抑制血管内皮细胞病理性活化和增殖一直是近年的研究热点。近期多项研究[4]证实,YAP 蛋白在血管内皮细胞活化和增殖方面发挥重要作用。本文通过ox-LDL 刺激HAoEC 构建AS 病理模型,阐述祛痰清瘀方对ox-LDL 诱导HAoEC 活化和增殖的抑制作用及其抑制YAP 活化的潜在机制,并在动物模型中进一步验证疗效,为该方在临床中用于防治糖尿病大血管病变提供更加充分的科学依据。

    1 材料与方法

    1.1 一般资料

    1.1.1 动物 12 周龄雄性SD 大鼠60 只,平均体重(250±20)g,实验操作符合《广东省实验动物管理条例》。

    1.1.2 细胞 HAoEC 购于美国Lonza。

    1.1.3 药物和试剂 祛痰清瘀方组方：熟地15 g、当归15 g、赤芍10 g、川芎10 g、红花10 g、桃仁9 g、半夏15 g、橘红15 g、白茯苓9 g、甘草4.5 g、地龙10 g,购于本院,制成含生药2 g/ml 的浓缩液。内皮细胞生长培养基(EGM-2)购于美国Lonza；TG、TC、LDL-C、HDL-C 胆固醇试剂盒购于南京建成；CCK8 试剂购于日本同仁；所有抗体购于美国CST。

    1.2 方法

    1.2.1 动物实验 通过喂饲含蔗糖20%、猪油10%、TC 3%、胆酸盐1%的高脂饲料结合腹腔注射35 mg/kg STZ 建立大鼠糖尿病模型 ......