孙洪光 孝飞飞 贾中明 王希龙 张国强 杨振林

    乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,严重危害着广大女性的健康[1]。化疗是乳腺癌治疗常用的治疗方式之一,但其疗效却一直受到多药耐药(multidrug resistance,MDR)的限制。乳腺癌干细胞(breast cancer stem cells,BCSCs)被认为是在肿瘤细胞中极少部分具有干细胞的特性的细胞亚群,虽只占极少部分,但却是肿瘤发生、发展与转移的根源。既往研究发现,经化疗治疗后,乳腺癌细胞中BCSCs 的比例较化疗前有了明显的提高[2],而跨膜蛋白引起的化疗药物外排是提高细胞对化疗药物耐受的重要途径。为此,本实验拟采用MACS 分选获得CD44+CD24-/low细胞亚群,测定其对化疗药物的外排作用,并检测其药物外排相关蛋白的表达水平,探究其与多药耐药的关系,报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 材料 多药耐药MCF-7/ADR 细胞株为本实验室低剂量缓慢诱导法所得,RPMI1640 培养基购自Gibco 公司,胎牛血清购自Hyclone 公司,阿霉素购自Invitrogen 公司,MTT 购自Sigma 公司,鼠抗人P-gp-PE、鼠抗人CD24-FITC、兔抗人CD44-PE 均购自eBioscience 公司。主要仪器：流式细胞仪(美国Becman Coulter 公司)、激光共聚焦显微镜(德国Leica公司)、MACS 分选系统(德国Miltenyi 公司)。

    1.2 实验方法

    1.2.1 细胞培养 MCF-7/ADR 细胞株于含10%胎牛血清的RPMI1640 培养液中培养,保持37℃,5%CO2饱和湿度培养 ......