王佳 赵卿

    肝癌作为常见癌症之一,其发病率和致死率均比较高,调查研究资料显示,目前该病发病率在全球前三位。有报道研究指出,维生素在血液凝固中有着非常重要的作用,特别是对心血疾病、骨骼健康[1]。也有研究表示,维生素K 在肿瘤形成以及生长中具有抑制功效,特别是维生素K2[2]。本文就维生素K2通过降低DBP 活性抑制肝癌的效果进行讨论分析。现报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 根据研究要求,将人源肝细胞HepG2细胞分为过表达DBP 组(A 组)、空载体质粒对照组(B 组)、敲低D-双功能蛋白组(C 组)、对照小干扰RNA 组(D 组)。其中A 组和C 组分别使用0～100 μmol/L不同浓度的维生素K2进行处理。

    1.2 实验方法 把HepG2 细胞接种至孔板中进行培养,温度为37℃,CO2浓度为5%,当细胞生长到70%融合度时予以转染。根据转染试剂使用要求,将质粒、小干扰RNA 分别溶解在没有血清、抗生素的RPMI1640 培养液中将其混合均匀。将脂质体Lipo-fectamine2000TM 溶解在没有血清与抗生素的RPMI1640 培养液中混合均匀,在室温放置5 min。把上述转染试剂分别和脂质体混合均匀,在室温放置20 min。而后弃去孔板中原有培养基,且利用新鲜没有血清和抗生素RPMI1640 的培养基对细胞进行洗涤2次。把各组脂质体以及质粒混合液滴入到每孔细胞中,放置在37℃环境中进行培养。6 h 后更换含有10%胎牛血清的培养基,培养48 h 后用于后面的实验。

    经过处理的细胞在蛋白提取、蛋白定量后借助裂解液稀释成浓度为5 μg/μl 的悬液,而后加上5×上样缓冲液在95℃条件下煮沸5 min ......