刘文杰 李巧玲 马科

    肺癌是目前全球发病率、死亡率最高的恶性肿瘤,依据肺癌细胞病理类型可分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌(NSCLC)[1],所有肺癌的5 年相对生存率仅为19%,NSCLC 的5 年生存率(23%)高于小细胞肺癌(6%)[2]。因肿瘤的隐匿性,大部分肺癌患者确诊已处于疾病晚期,错过了最佳手术时期,在诸多的治疗方式中化疗仍然是未来治疗NSCLC 的主要手段[3]。化疗在治疗肺癌的过程中常伴随食欲减退、呕吐、骨髓抑制等毒副反应[4],患者因自身耐受差而影响治疗效果,故而寻求中西医结合治疗。爱康方是马科教授诊治肺癌工作中从中医学、临床效果及现代医学出发筛选出用于治疗肺癌的经验方,在前期研究的基础上本实验将爱康方、生理盐水通过大鼠灌胃,环磷酰胺腹腔注射一定时间,经心脏取血[5],取含药血清,用不同成分的含药血清体外干预A549 细胞一定时间,检测A549 细胞内Bad、Caspase-9 表达的影响,探讨爱康方治疗肺癌的机理。

    1 材料与方法

    1.1 材料 动物：雄性SPF 级的Sprague-Dawley(SD)大鼠[宁夏回族自治区实验动物中心,许可证号：SCXK(宁)2017-0001]40 只,体重(220±20)g。细胞：A549 细胞株(武汉普诺赛生命科技有限公司,中国)。

    1.2 仪器及试剂

    1.2.1 仪器 制冰机(AF10 SCOTSMAN,美国)；去离子水仪(PALL,Purelab Plus,美国)；高速离心机(Eppendorf 公司,德国)；电子天平(Sartorius 公司,德国)；生物分光光度计(Eppendorf 公司,德国)；荧光定量PCR 仪(Applied Biosystems 公司,美国)。

    1.2.2 试 剂 Bad(批号：AB90435),Caspase-9(批号：AB52298),Anti-β-actin(批 号：AB179467)(abcam公司,英国)；小鼠二抗试剂盒(批号：PV-9002,北京中杉金桥公司,中国)；天根总RNA 提取试剂盒(批号：DP419,上海生工生物有限公司,中国),Bad、Caspase-9的基因引物(上海生工生物有限公司,中国)；全蛋白提取试剂盒(KGP250)、SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒(KGP113)、Trizol[Invitrogen(Cat# 15596-026)](凯基生物科技发展有限公司,南京) ......