柳青 李云慧

    肺炎链球菌(streptococcus pneumoniae,SP)是一种常见致病菌,属于革兰阳性双球菌,对儿童和老年人的损伤最大,可导致儿童和成人发生社区获得性肺炎。我国发病率约是全世界的15%左右,而且6 岁以下儿童因为感染肺炎链球菌后死亡的人数也是最多的[1]。肺炎链球菌已成为重要的全球公共卫生问题,除疫苗外,目前没有公共卫生策略可减少其发病率[2]。肺炎链球菌的外囊多糖可以使体内产生保护性抗体,并用于制备疫苗。对肺炎细菌的血液进行监测,为肺炎细菌疫苗的制备和疾病预防提供重要的科学依据。经典荚膜肿胀法是肺炎链球菌的血清分型方法,虽然其发挥着重要作用,但也有一些局限性,例如低分辨率、复杂的操作步骤和主观判断结果。随着荚膜多糖基因序列(CPS)的出现,分子分类技术以其灵敏度高、快速、准确、分辨率高、质量好等优点逐渐得到广泛应用。本文使用经典的荚膜肿胀方法和多重PCR 方法用于相同标本的血清分型,为建立快速准确的血清分型方法提供依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料 选取2019 年1 月～2020 年12 月在北部战区总医院住院患者中分离的50 株肺炎链球菌作为研究对象,排除相同患者同一部位重复分离菌株。

    1.2 方法 分别采用经典荚膜肿胀法与多重PCR 法进行血清分型检测。

    1.2.1 试剂与仪器 哥伦比亚血平板,VITEK compack 型全自动分析系统,棋盘式分型系统(pneumotest kit)试剂盒(丹麦国家血清研究所)0.1 g/dl的亚甲蓝溶液,Leica DM2000 显微镜,QIAamp⑧DNA Mini Kit 核酸提取试剂盒,肺炎链球菌血清型分型引物,Taq DNA 聚合酶,PCR 扩增仪等 ......