陈云臣 刘洋 杨勇 孙东翀

    阴茎勃起功能障碍(erectile dysfunction,ED)是指在性刺激情况下成年男性的阴茎难以正常或维持勃起,且无法完成满意的性交,病程>6 个月[1]。原发性神经元组织损伤之后,一系列的代谢失调,包括缺血、兴奋性毒素、钙和线粒体失调,最终导致炎症介导的继发性神经元损伤。海绵体神经损伤后内皮细胞和海绵体平滑肌发生凋亡,一氧化氮合酶阳性神经细胞受到损伤,纤维增生性细胞因子上调,进而出现海绵体平滑肌纤维化[2]。由于对阴茎海绵体神经的损伤,根治性前列腺切除术(radical prostatectomy,RP)术后导致的ED 发生率较高[3],虽然探索中各种治疗方法较多,但目前疗效明确的方法并不多。熊果酸(ursolic acid,UA)是一种具有多种药用特性的中药提取物,在植物界分布较广泛,如山楂、栀子、山茱萸,车前等中药中。研究发现,熊果酸具有镇静、抗炎、抗糖尿病、抗溃疡、降低血糖,以及明显的抗氧化功能等多种生物学效应[4,5]。熊果酸在脑、脊髓损伤及神经退化性疾病的治疗方面有神经保护作用[6],提示其有可能对RP 术后因海绵体神经损伤导致的ED 发挥潜在的治疗作用。因此,本研究以神经损伤性ED 大鼠为研究对象,制备阴茎海绵体神经损伤模型,观察熊果酸对大鼠勃起功能恢复的影响,初步探讨其相关作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料 18 只购于北京科宇有限公司[许可证号：SCXK(京)2018-0010]健康无病原体 Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠,8 周龄,体重250～300 g。所有大鼠适应性喂养1 周后,随机分为假手术对照组、模型对照组(双侧海绵体神经损伤)和治疗组(双侧海绵体神经损伤+熊果酸治疗),每组6 只。

    1.2 方法

    1.2.1 主要实验器材及试剂 熊果酸(上海爱必信生物科技有限公司)；MP150 多导电生理仪(美国Biopac公司)；稳压稳流定时电泳仪(北京六一仪器厂)；Centrifuge 5417R 低温离心机(美国Eppendorf 公司)；显微手术器械(上海医疗器械厂)；α-SMA、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)和N-NOS 兔多克隆抗体(美国Abcam 公司)。全部实验操作均在解放军总医院动物实验室开展,参照解放军总医院动物使用指南执行。

    1.2.2 神经损伤模型建立 参照王飞翔等[7]提供的方法建立大鼠神经性ED 模型。所有SD 大鼠使用3%戊巴比妥钠溶液30 mg/kg 腹腔注射进行麻醉。在下腹部行正中切口,前列腺背外侧找到两侧盆神经节,距盆神经节发出3～5 mm 处用小弯血管钳分别钳夹双测海绵体神经,血管钳扣合至最后一个咬齿,钳夹海绵体神经各2 min ......