陈国斌 祝文峰 史文娟 董倩

    宫腔粘连 (intrauterine adhesion,IUA) 是最常见的子宫内膜病变疾病之一[1]。近年来,由于子宫内膜损伤和感染的增加,IUA 的发病率有所上升[2]。目前尽管经宫腔镜下宫腔粘连分离术是IUA 的标准治疗方法,但治疗后复发率仍较高[3]。IUA 与继发性不孕和流产密切相关,是目前影响女性生殖健康的重要病因之一[4],因此研究IUA 的发病机制对于IUA 的防治具有重要的意义。相关研究表明,子宫内膜纤维化是IUA 最重要的病理特征之一[5]。基质细胞作为子宫内膜的主要细胞群之一,是子宫内膜功能的重要介质,因此,探究IUA 子宫内膜基质细胞纤维化相应的分子机制具有重要的意义。同源框转录反义RNA (homeobox gene antisense intergenic RNA,HOTAIR)是一种与多种纤维化疾病相关的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA),已有研究报道,过表达HOTAIR 可促进子宫内膜纤维化[6],但具体分子机制尚不完全明确。lncRNA 通过海绵化miRNA 来调控mRNA 表达是其发挥其作用的方式之一[7]。本研究通过生物信息学分析发 现,HOTAIR 与miR-326、miR-326 与NUS1 存 在结合位点。相关文献报道,miR-326 在IUA 子宫内膜组织中下调表达,过表达miR-326 通过下调促纤维化基因来抑制子宫内膜纤维化[8]；NUS1 在IUA 组织中上调,且其高表达与IUA 的严重程度呈正相关[9]。而HOTAIR 能否通过调控miR-326/NUS1 轴影响IUA 子宫内膜基质细胞纤维化尚不明确。因此,本研究主要探究HOTAIR 对IUA 子宫内膜基质细胞纤维化的影响以及其作用机制。

    1 材料与方法

    1.1材料 收集2018 年2 月～2020 年2 月在本院首次确诊为IUA 的18 例患者的子宫内膜组织,另取同期因不孕症接受宫腔镜子宫内膜活检的18 例患者的子宫内膜组织作为对照。本研究得到本院伦理委员会审核批准,术前获得所有患者的书面知情同意书。HESC 细胞购自上海弘顺生物公司。

    1.2主要试剂 HOTAIR 小干扰RNA(si-HOTAIR)及其阴性对照(si-NC)、HOTAIR 过表达物(pIRES2-HOTAIR) 及其阴 性对照(pIRES2)、miR-326 模拟物(miR-326 mimic)及其阴性对照(mimic NC)均购自上海美轩生物公司；CCK-8 试剂盒购自上海广锐生物公司；Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡试剂盒购自上海富雨生物公司；兔源-抗纤连蛋白(Fibronectin,FN)、Ⅰ型胶原蛋 白α1 链(collagen type 1 α1 chain,COL1A1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、NUS1、GAPDH 及过氧化物酶标记的羊抗兔免疫球蛋白G(IgG)二抗均购自英国Abcam 公司 ......