女性感染人乳头状病毒基因分型状况
摘要：探讨油区1354例女性感染人乳头状病毒基因的分型状况。方法2015年元月至2016年九月收集总医院门诊和住院病人1354例女性标本，采用达安基因生物科技有限公司提供的基因扩增仪和凯普生物科技有限公司提供的分子杂交仪，利用基因芯片技术检测妇女HPV分型感染情况。
关键词：人乳头状病毒(HPV)；高危亚型，低危亚型检测
文章编号：1673-8640(2018)-0011-02
中图分类号：R737.33
文献标志码：B
人乳头状病毒(HPV)为嗜上皮性病毒，属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，是球形DNA病毒。HPV病毒能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖，现已分离出130多种，该病毒只侵犯人类，可引起人类良性肿瘤和疣、黏膜上乳头状瘤以及恶性肿瘤如宫颈癌等，性传播是其感染的主要渠道，HPV的感染和肛癌或阴茎癌有潜在的联系。不同的亚型HPV对宫颈上皮的致病性也不同，如低危亚型感染仅诱发生殖器疣样病变，而高危亚型感染是导致宫颈癌变发生最主要的原因。我们现采用DNA扩增与基因杂交的方法，从2015年元月至2016年九月收集了总医院门诊和住院病人1354例女性标本进行了HPV基因分型检测，分析油田区域妇女宫颈感染HPV基因分型状况，现报道如下
资料方法
一、临床资料2015年元月至2016年九月在我院门诊就诊和住院的1354例女性，年龄20-60岁，平均年龄41.5岁。
二、研究方法(1)标本采集以窥阴镜暴露宫颈，用棉拭子擦去宫颈分泌物，然后使用专用的HPV宫颈刷置于宫颈口，轻轻转动宫颈刷4-5圈以获得足量的上皮细胞样本，慢慢取出宫颈刷，然后沿刷柄折痕处将宫颈刷柄折断，放入装用专用细胞保存液的洗脱液管中浸泡.旋紧管盖，写上患者姓名送至检验科.
(2)标本处理将宫颈刷在洗脱液中充分漂洗(放在振荡器上振荡1分钟)后，用1000μl的移液器将洗脱液全部转移到有1.5ml微量离心管中，将离心管放到高速离心机中，13000r/min离心10分钟，弃上清液并保留管底的沉淀细胞块，加入50μl裂解液到离心管中，充分混匀，加入金属浴中煮沸10分钟后，把离心管放到高速离心机中，以13000r/min离心10分钟，保留上清液备用.
(3)仪器与检测试剂HPV基因检测试剂盒(凯普生物科技有限公司)
基因扩增仪(达安基因生物科技有限公司)
分子杂交仪(凯普生物科技有限公司)
(4)HPV基因分型检测步骤主要包括： DNA提取、PCR扩增、杂交、洗膜、显色及结果判读。检测的23种亚型包括18种高危型和5种低危型。18种高危型分别为16、18、31 、33 、35、 39 、45、 51、 52 、53、 56 、58、 59、 66、 68、 73、CP8304和83型，5种低危型包括 6 、11、 42、 43 、44 。有3种或3种以上感染者不论是高危型或低危型均为多重感染。
三、统计学方法使用SPSS12.0软件进行统计学处理。各年龄组检出差异采用x2检验和P检验。
结果分析
一、HPV感染率1354例标本中共检测出HPV阳性456例，阳性率33.68%
二、HPV亚型分布在HPV阳性456例标本中，低危型24例，占发病人数的5.3% ，主要为6 、11和41型。高危型432例，占发病人数的94.7% ，主要以16、 39、 51、52、 53、 58和68型为主
三、双重感染的情况456例HPV感染者中双重感染13例，占HPV感染的2.85% 。
四、感染人群年龄分布感染人群的分布以31-40组和41-50组为高峰，41-50感染率最高，50岁以后筛查人数减少，感染率也随之下降，各年龄段HPV感染率见表一
讨论
宫颈癌是最常见的女性恶性肿瘤之一，在全球范围内的女性恶性肿瘤中，其发病率和死亡率仅次于乳腺癌，为女性第二大恶性肿瘤，在美国，每年新确诊的病例超过12000例，而在中国每年约有13万的宫颈癌新发病例，占世界宫颈癌型发病率总数的28.2% [1]。人乳头状病毒(HPV)含有100多种病毒，一些类型的HPV(如HPV-16， HPV-18， HPV-31， HPV-45等)被认为是高风险的。它们通常不会引起肉眼可见的疣，但是当它们造成持续感染时，就已经与子宫颈癌及一些不常见的癌症，如阴茎癌，口腔癌，咽喉癌及肛癌等有了联系。HPV是目前已被肯定的与宫颈癌相关的DNA肿瘤病毒[2]，有报道指出，99.7% 的宫颈癌患者可检出HPV病毒[3]。欧洲生殖道感染和肿瘤研究组织已建议将HPV DNA检测作为宫颈癌初筛的首选方法。
本次检测使用基因芯片技术检测妇女HPV感染情况。该方法整合了PCR和核酸杂交技术，与传统的原位杂交方法比较，可在芯片上对同一份标本进行5种低危型和18种高危型的检测，具有高通量，高灵敏度等优点。本次检测结果表明1354例标本共检出HPV阳性456例(33.67%)，显示出油田地区女性人群中有较高的感染率。而456例HPV阳性的标本共检出15种亚型，检出感染单一HPV亚型313例(68.6%)，双重感染2种亚型的102例(22.3%)，感染3种以上亚型为41例(8.99%)。低危型主要为6、 11和41型，高危型主要为16、 39 、51、 52、 53、 58和68型，其中HPV16型的感染率明显高于其他亚型，与文献报道基本一致[4]。
年龄因素是HPV感染和宫颈癌发生的相关因素，本次检测总的感染率为33.66%，而41-50岁感染率为最高占20.97%。与粤东地区(48.3%)，广州(59.7%)，北京(57.7%)相比，感染率相对较低，与山西(27.5%)大致相同[5]。
高危型HPV持续感染是宫颈癌及癌前病变的必要条件，HPV基因的分布有地区差异，与宫颈癌相关的型别也不尽相同，尽管在不同国家，不同地区HPV16亚型的检出率不同，但都有相对较高的水平，本次油田女性HPV阳性中HPV16型的检出率仍然是最高47.5%(217/456)，其后依次是39、 51、 52、 53、 58和68 ，與国内文献报道相同[6]。多重感染与单一感染相比，体内HPV可能更难以清除，因此临床上要高度重视高危型HPV多重感染，积极检测并进行严密追踪随访，降低宫颈癌的发生.
本次检测方法整合了PCR和核酸杂交技术，在同一张芯片上可对HPV低危型和高危型同时检测。具有很高的创新性，实用性及经济、社会效益：通过培训可在基层医院开展。本项目的社会效益极大，通过检测HPV的感染情况，可以预防宫颈癌的发病率。
众多的研究已证明妇女宫颈癌的发病与HPV感染密切相关，都是由一种病毒引起的。不同的地区之间，HPV各型别的分布也存在差异，了解HPV在特定地区的人群感染及型别分布差异，对HPV所致疾病的防治及宫颈癌疫苗研制应用具有重要的指导意义。宫颈癌早发现，早诊断，治愈率越高。
参考文献
[1]马兰娜，吴瑞芳，周艳秋等，人乳头状基因亚型与宫颈癌相关的关系[J]，中国妇产科临床杂志2015.5(7)：346-350
[2]符伟灵，生物芯片研究现状及展望[J]解放军检验医学杂志2002.1(3)：107-109
[3]周毅人乳头状病毒与宫颈癌的相关调查[J]中华医院感染学杂志，2004.2(3)：129-130
[4]庞伟鸿，刘红杏，宁学珍等，基因芯片检测技术在女性生殖道HPV分型感染中的应用[J]国际检验医学杂志2009.30(7)：630-632
[5]陈忠领，魏新燕，范美珍等女性感染人乳头状病毒基因分型结果分析[J]国际检验医学杂志2010.31(9)：944-905
[6]陈占国，周武，许张哗等，导流杂交方法检测人乳头瘤病毒分型的临床应用[J]中华医院感染学杂志2008.18(9)；1345-1348.
(收稿日期：2017-09-11), 百拇医药(夏芳 赵娜)
关键词：人乳头状病毒(HPV)；高危亚型，低危亚型检测
文章编号：1673-8640(2018)-0011-02
中图分类号：R737.33
文献标志码：B
人乳头状病毒(HPV)为嗜上皮性病毒，属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，是球形DNA病毒。HPV病毒能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖，现已分离出130多种，该病毒只侵犯人类，可引起人类良性肿瘤和疣、黏膜上乳头状瘤以及恶性肿瘤如宫颈癌等，性传播是其感染的主要渠道，HPV的感染和肛癌或阴茎癌有潜在的联系。不同的亚型HPV对宫颈上皮的致病性也不同，如低危亚型感染仅诱发生殖器疣样病变，而高危亚型感染是导致宫颈癌变发生最主要的原因。我们现采用DNA扩增与基因杂交的方法，从2015年元月至2016年九月收集了总医院门诊和住院病人1354例女性标本进行了HPV基因分型检测，分析油田区域妇女宫颈感染HPV基因分型状况，现报道如下
资料方法
一、临床资料2015年元月至2016年九月在我院门诊就诊和住院的1354例女性，年龄20-60岁，平均年龄41.5岁。
二、研究方法(1)标本采集以窥阴镜暴露宫颈，用棉拭子擦去宫颈分泌物，然后使用专用的HPV宫颈刷置于宫颈口，轻轻转动宫颈刷4-5圈以获得足量的上皮细胞样本，慢慢取出宫颈刷，然后沿刷柄折痕处将宫颈刷柄折断，放入装用专用细胞保存液的洗脱液管中浸泡.旋紧管盖，写上患者姓名送至检验科.
(2)标本处理将宫颈刷在洗脱液中充分漂洗(放在振荡器上振荡1分钟)后，用1000μl的移液器将洗脱液全部转移到有1.5ml微量离心管中，将离心管放到高速离心机中，13000r/min离心10分钟，弃上清液并保留管底的沉淀细胞块，加入50μl裂解液到离心管中，充分混匀，加入金属浴中煮沸10分钟后，把离心管放到高速离心机中，以13000r/min离心10分钟，保留上清液备用.
(3)仪器与检测试剂HPV基因检测试剂盒(凯普生物科技有限公司)
基因扩增仪(达安基因生物科技有限公司)
分子杂交仪(凯普生物科技有限公司)
(4)HPV基因分型检测步骤主要包括： DNA提取、PCR扩增、杂交、洗膜、显色及结果判读。检测的23种亚型包括18种高危型和5种低危型。18种高危型分别为16、18、31 、33 、35、 39 、45、 51、 52 、53、 56 、58、 59、 66、 68、 73、CP8304和83型，5种低危型包括 6 、11、 42、 43 、44 。有3种或3种以上感染者不论是高危型或低危型均为多重感染。
三、统计学方法使用SPSS12.0软件进行统计学处理。各年龄组检出差异采用x2检验和P检验。
结果分析
一、HPV感染率1354例标本中共检测出HPV阳性456例，阳性率33.68%
二、HPV亚型分布在HPV阳性456例标本中，低危型24例，占发病人数的5.3% ，主要为6 、11和41型。高危型432例，占发病人数的94.7% ，主要以16、 39、 51、52、 53、 58和68型为主
三、双重感染的情况456例HPV感染者中双重感染13例，占HPV感染的2.85% 。
四、感染人群年龄分布感染人群的分布以31-40组和41-50组为高峰，41-50感染率最高，50岁以后筛查人数减少，感染率也随之下降，各年龄段HPV感染率见表一
讨论
宫颈癌是最常见的女性恶性肿瘤之一，在全球范围内的女性恶性肿瘤中，其发病率和死亡率仅次于乳腺癌，为女性第二大恶性肿瘤，在美国，每年新确诊的病例超过12000例，而在中国每年约有13万的宫颈癌新发病例，占世界宫颈癌型发病率总数的28.2% [1]。人乳头状病毒(HPV)含有100多种病毒，一些类型的HPV(如HPV-16， HPV-18， HPV-31， HPV-45等)被认为是高风险的。它们通常不会引起肉眼可见的疣，但是当它们造成持续感染时，就已经与子宫颈癌及一些不常见的癌症，如阴茎癌，口腔癌，咽喉癌及肛癌等有了联系。HPV是目前已被肯定的与宫颈癌相关的DNA肿瘤病毒[2]，有报道指出，99.7% 的宫颈癌患者可检出HPV病毒[3]。欧洲生殖道感染和肿瘤研究组织已建议将HPV DNA检测作为宫颈癌初筛的首选方法。
本次检测使用基因芯片技术检测妇女HPV感染情况。该方法整合了PCR和核酸杂交技术，与传统的原位杂交方法比较，可在芯片上对同一份标本进行5种低危型和18种高危型的检测，具有高通量，高灵敏度等优点。本次检测结果表明1354例标本共检出HPV阳性456例(33.67%)，显示出油田地区女性人群中有较高的感染率。而456例HPV阳性的标本共检出15种亚型，检出感染单一HPV亚型313例(68.6%)，双重感染2种亚型的102例(22.3%)，感染3种以上亚型为41例(8.99%)。低危型主要为6、 11和41型，高危型主要为16、 39 、51、 52、 53、 58和68型，其中HPV16型的感染率明显高于其他亚型，与文献报道基本一致[4]。
年龄因素是HPV感染和宫颈癌发生的相关因素，本次检测总的感染率为33.66%，而41-50岁感染率为最高占20.97%。与粤东地区(48.3%)，广州(59.7%)，北京(57.7%)相比，感染率相对较低，与山西(27.5%)大致相同[5]。
高危型HPV持续感染是宫颈癌及癌前病变的必要条件，HPV基因的分布有地区差异，与宫颈癌相关的型别也不尽相同，尽管在不同国家，不同地区HPV16亚型的检出率不同，但都有相对较高的水平，本次油田女性HPV阳性中HPV16型的检出率仍然是最高47.5%(217/456)，其后依次是39、 51、 52、 53、 58和68 ，與国内文献报道相同[6]。多重感染与单一感染相比，体内HPV可能更难以清除，因此临床上要高度重视高危型HPV多重感染，积极检测并进行严密追踪随访，降低宫颈癌的发生.
本次检测方法整合了PCR和核酸杂交技术，在同一张芯片上可对HPV低危型和高危型同时检测。具有很高的创新性，实用性及经济、社会效益：通过培训可在基层医院开展。本项目的社会效益极大，通过检测HPV的感染情况，可以预防宫颈癌的发病率。
众多的研究已证明妇女宫颈癌的发病与HPV感染密切相关，都是由一种病毒引起的。不同的地区之间，HPV各型别的分布也存在差异，了解HPV在特定地区的人群感染及型别分布差异，对HPV所致疾病的防治及宫颈癌疫苗研制应用具有重要的指导意义。宫颈癌早发现，早诊断，治愈率越高。
参考文献
[1]马兰娜，吴瑞芳，周艳秋等，人乳头状基因亚型与宫颈癌相关的关系[J]，中国妇产科临床杂志2015.5(7)：346-350
[2]符伟灵，生物芯片研究现状及展望[J]解放军检验医学杂志2002.1(3)：107-109
[3]周毅人乳头状病毒与宫颈癌的相关调查[J]中华医院感染学杂志，2004.2(3)：129-130
[4]庞伟鸿，刘红杏，宁学珍等，基因芯片检测技术在女性生殖道HPV分型感染中的应用[J]国际检验医学杂志2009.30(7)：630-632
[5]陈忠领，魏新燕，范美珍等女性感染人乳头状病毒基因分型结果分析[J]国际检验医学杂志2010.31(9)：944-905
[6]陈占国，周武，许张哗等，导流杂交方法检测人乳头瘤病毒分型的临床应用[J]中华医院感染学杂志2008.18(9)；1345-1348.
(收稿日期：2017-09-11), 百拇医药(夏芳 赵娜)