宫颈组织中脆性组氨酸三联体基因和凋亡抑制蛋白的表达及临床意义(2)
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1.3结果判断染色结果判定由两位经验丰富的妇科病理医生盲法独立阅片完成,核对结果,取得共识。FHIT表达结果判定:FHIT蛋白以胞浆和/或胞核内出现棕黄色颗粒视为阳性细胞。在400倍显微镜下选10个视野,共计数1000个细胞。FHIT表达的判断标准[3]:①根据染色强度:不染色或弱染色(浅黄色)为1分;中度染色(棕黄色)为2分;强染色(棕褐色)为3分;②根据染色范围:阳性细胞百分比<10%为1分,10%~50%为2分,>50%为3分。将上述两种得分相乘,≤3分为FHIT表达缺失,记为阴性(-),>3分为表达正常,记为阳性(+)。survivin阳性以细胞核或细胞质呈现棕黄色颗料状染色为标准。计算阳性细胞百分率:A 0~25%;B 26%~50%;C 51%~75%;D>75%。肿瘤显色深浅按:(a)阳性细胞呈淡黄色云雾状为1分;(b)阳性细胞呈黄色颗粒状为2分;(c)阳性细胞呈深黄色为3分。计算两者乘积,以得分≤1分为阴性,>1分为阳性。。
1.4统计学方法所有数据输入EXCEL进行整理,统计处理均用SPSS for windows 11.5统计软件进行。免疫组化的阳性表达率为计数资料,采用四格表或列联表χ2检验。设定P<0.05为有统计学意义。
2结果
2.1不同病变宫颈组织中FHIT的表达在正常宫颈组织中FHIT阴性率为0。CIN组、CINⅠ组、CINⅡ/Ⅲ组和宫颈癌组中FHIT的阴性率分别为24.4%(11/45)、10.0%(2/20)、36.0%(9/25)和66.7%(40/60)。运用列联表χ2检验,对各组间阴性率进行比较,差异有统计学意义(P<0.05)。正常组与CIN组、与宫颈癌组比较,CINⅠ组与CINⅡ/Ⅲ组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。
2.2不同宫颈组织中survivin的表达在正常宫颈组织、宫颈CIN组、宫颈癌组中survivin的阳性率分别是20.0%(4/20)、31.1%(14/45)和95.0%(57/60),运用列联表χ2检验,对各组间阳性率进行比较,差异有统计学意义(P<0.05)。
2.3FHIT与survivin表达之间的关系在宫颈CIN和宫颈癌中,FHIT表达阴性而survivin表达阳性的患者为51例,FHIT表达阳性而PCNA表达阴性的患者为4例。两个指标的表达同时为阳性的患者为50例,而两个指标的表达同时为阴性的患者为0例。应用配对四格表χ2检验,差异有统计学意义。
3讨论
宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一,发病率在女性恶性肿瘤中居第二位,仅次于乳腺癌。宫颈癌有较长的癌前病变阶段,约为10年。早期检查,尽早发现癌前病变是预防宫颈癌的最有效手段[4]。脆性组氨酸三联体基因(FHIT)是在染色体3p区域发现的候选抑癌基因,已有研究发现该基因与多种肿瘤的发生发展有关[5]。survivin是一个新克隆的凋亡抑制基因,是IAP家族的一个新成员。IAP家族一般含有2~3个棒状病毒重复结构(buculovirus IAP repeat BIR)和羧基末端锌指结构,其中主要是BIR结构发挥抗凋亡作用,而survivin只含有一个BIR结构,羧基末端缺乏锌指结构,代以交织螺旋结构。其选择性表达常见于恶性肿瘤,而在癌旁正常组织和成人终末分化组织几乎不表达。
研究表明,FHIT蛋白的C末端部分与酵母泛素结合酶9相互作用,参与S期及M期细胞周期蛋白的降解,进一步调控细胞周期[6]。Ishii等将FHIT基因导入7个食管癌细胞系(其中的5个不表达内源性FHIT蛋白),结果有2个细胞系发生了明显的凋亡(TE4和TE14),同样,在低水平表达内源性FHIT蛋白的Hela细胞系中也有类似的现象[7]。Greenspan等发现6/7宫颈鳞癌细胞系和68%原发性宫颈鳞癌检测不到FHIT转录产物或检测到异常产物,而相应在正常宫颈上皮则表现为FHIT的强表达[8]。FHIT蛋白在肿瘤中的作用尚不完全清楚,一般认为存在以下机制:①调控细胞周期[8];②诱导细胞凋亡;③Ap3A水解酶活性;④FHIT底物复合物的作用;⑤Asish等[9]发现FHIT蛋白可与tubulin结合,后者为形成微管的主要成分,从而抑制细胞的分裂与增生;⑥mRNA脱帽功能;⑦FHIT基因失活还与DNA损伤后修复能力增加相关,提示FHIT基因依赖的DNA损伤修复反应可能在肿瘤进展中起一定作用[10]。
FHIT和survivin在宫颈癌中表达有一定相关性。宫颈癌的发生如同其他的恶性肿瘤一样,是多因素损伤的复杂过程。分子遗传学研究发现,宫颈癌细胞在3号染色体短臂尤其是3P1321.1区域有着高频率等位基因缺失。FHIT基因起始编码外显子E5与着丝粒侧发现了高危型HPV整合点,而HPV是已经明确的宫颈鳞癌的致病因素之一。由此可见,宫颈癌中FHIT蛋白表达的检测对探讨宫颈鳞癌的发病机制、早期诊断有明确的意义。凋亡抑制蛋白(IAP)是细胞内固有的、在进化上极具保守性的一组蛋白质,具有抑制凋亡的作用。越来越多的证据表明,survivin参与细胞分裂的调控。本研究结果显示,在宫颈CIN和宫颈癌中,FHIT和凋亡抑制蛋白的表达有一定的相关性(P<0.05)。
总之,肿瘤的发生、发展是一个多步骤的过程,是在致病因素作用同时,多种基因同时或先后协同作用的结果。本研究表明,FHIT和survivinA均参与了宫颈癌前病变和宫颈癌的发生、发展。因此,笔者认为,FHIT和survivin对于宫颈癌前病变和宫颈癌的筛查及早期诊断具有一定的临床应用价值。
参考文献
[1]Volgareva G,Zavalishina L,Andreeva Y,et al.Protein p16 as a marker of dysplastic and neoplastic alterations in cervical epithelial cells.BMC Cancer,2004,4(1):58.
[2]Holcik M.The IAP proteins.Trends Genitics,2002,18(10):537-538.
[3]Connoll YD C,Grccnspan DL,Wu R,et al.Loss of FHIT expression in invasive cervical carcinomas and intraepithelial lesions with invasive disease ......
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