组织蛋白酶E氨基端催化性残基的确定
活性部位基序,天门冬氨酸蛋白酶,变异体解析
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刘剑 广东药学院生命科学与生物制药学院;
【摘要】目的验证组织蛋白酶E保守基序DTG中第98位天门冬氨酸残基为组织蛋白酶E氨基端催化性残基。方法通过基因定点突变技术将第98位天门冬氨酸残基用丙氨酸替代,制成变异体D98A,并将野生型和变异型的大鼠组织蛋白酶E基因在人胚胎肾293T细胞中进行异源表达。结果在细胞培养基和细胞提取物中都发现有野生型和变异型的大鼠组织蛋白酶E的酶原蛋白表达。突变体D98A酶原在酸性条件下不能转变为酶,也没有酶活性。结论组织蛋白酶E第98位天门冬氨酸残基是酶的催化性残基,对酶的催化活性非常重要。
【关键词】 活性部位基序 天门冬氨酸蛋白酶 组织蛋白酶E 变异体解析
【基金】广东省科技计划项目基金资助(项目编号:2008B060600055)
【分类号】R346
组织蛋白酶E是一种细胞内天门冬氨酸蛋白酶,属于胃蛋白酶家族。组织蛋白酶E比较特别,只存在于特定的细胞中,如淋巴组织、胃肠道、泌尿器官和血细胞等。不同细胞类型中组织蛋白酶E具有不同的细胞内定位。多项研究提示,组织蛋白酶E可能有多方面的重要功能。例如,组织蛋白酶E参
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[摘要]目的 验证组织蛋白酶E保守基序DTG中第98位天门冬氨酸残基为组织蛋白酶E氨基端催化性残基。方法通过基因定点突变技术将第98位天门冬氨酸残基用丙氨酸替代，制成变异体D98A，并将野生型和变异型的大鼠组织蛋白酶E基因在人胚胎肾293T细胞中进行异源表达。结果在细胞培养基和细胞提取物中都发现有野生型和变异型的大鼠组织蛋白酶E的酶原蛋白表达。突变体D98A酶原在酸性条件下不能转变为酶，也没有酶活性。结论组织蛋白酶E第98位天门冬氨酸残基是酶的催化性残基，对酶的催化活性非常重要。
[关键词]活性部位基序；天门冬氨酸蛋白酶；组织蛋白酶E；变异体解析
[中图分类号]R34
[文献标识码]A
[文章编号]1673-9701(2009)20-01-03
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