不同途径移植大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)对大鼠肝硬化的治疗作用(2)
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1.2.4BMSCs的移植取造模成功的肝硬化模型大鼠50只,随机分为对照组,门静脉移植组,肝脏局部移植组,脾脏局部移植组,尾静脉移植组。术前2h给予青霉素40万U/kg肌肉注射,予1%戊巴比妥60mg/kg腹腔内麻醉,对照组仅行开腹术;经尾静脉移植组经尾静脉注射DAPI标记的BMSCs悬液1mL之后,行开腹术;其余三组开腹后分别经肝脏、脾脏、门静脉注射DAPI标记的BMSCs悬液1mL。压迫注射点5min后,无出血后,逐层关腹。术后青霉素40万U/kg肌肉注射3d,预防感染。
1.2.5检测ALT、TBIL、ALB术后各组大鼠仍然以0.3mL/100g的维持剂量皮下注射40%CCl4 植物油溶液,予正常饮食喂养。3周后处死所有实验动物,取其静脉血检测ALT、TBIL、ALB,取肝脏做冰冻切片,荧光显微镜下观察移植率。
1.3统计学分析
所有数据均采用均数±标准差表示,采用SPSS17.0统计软件包进行统计学处理。用Levene检验方差齐性,如果符合方差齐性,则采用LSD-t检验,如果不符合,则采用Kruskal-Wallis检验,P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1BMSCs的培养及标记
原代培养中细胞为分散、集落方式增殖,杂质细胞较多,相差倒置显微镜下观察显示贴壁细胞呈梭形或纺锤形。见封三图1。随着换液次数增多,漂浮细胞随换液除去,贴壁细胞数量逐渐增多。原代生长较为迅速,培养8～10d即可传代。传代后,细胞均匀分布,呈长梭形细胞,杂质细胞明显减少,BMSCs纯度升高,当细胞增多时,呈漩涡状生长,一般4～5d即可再次传代。荧光镜下,DAPI标记1d后的BMSCs,胞核可见明亮蓝色荧光,标记率约为99%。见封三图2。
2.2肝硬化大鼠模型的制备
诱导期内大鼠活动减少,精神萎靡,进食减少。造模期间,大鼠被毛逐渐杂乱而无光泽,无拒饮拒食现象发生,整体耐受状态良好。造模结束时,大鼠死亡5只,原因可能是CCl4注射过量 ......
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