LY294002对人乳腺癌细胞株MCF-7/ADR的耐药逆转作用(2)
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2实验方法
2.1细胞培养
MCF-7和MCF-7/ADR细胞用含10%小牛血清的1640培养液,在37℃、5%CO2培养箱中培养。0.25%胰蛋白酶消化传代。
2.2MTT比色法检测
2.2.1 MTT法测定LY94002的安全浓度 实验分MCF-7+ LY294002组、MCF-7/ADR+LY294002组、对照组,收集对数生长期细胞,调整MCF-7和MCF-7/ADR细胞浓度分别为 0.5×108cells/L和1×108cells/L,按每孔100μL铺96孔板,培养24h,待细胞贴壁后将MCF-7和MCF-7/ADR细胞按以上分组加药,LY294002浓度分别为5、10、20、40μmol/L,每组所加药物最终为100μL,每组设3个复孔,培养24h后每孔加入20μL(0.5g/L)的MTT溶液,培养4h后小心吸去孔内培养液,每孔加入150μL二甲基亚砜(DMSO),置摇床低速震荡10min。自动酶标仪492nm测各孔吸光度(A)值,取三组平均值,计算细胞生长抑制率。抑制率(%)=(1-实验组A平均值/对照组A平均值)×100%。
2.2.2MTT法测定MCF-7/ADR耐药细胞株的耐药倍数实验分MCF-7+阿霉素组、MCF-7/ADR+阿霉素组、对照组。取阿霉素浓度0.1、0.2、0.4、0.8μmol/L 具体方法同上。求出阿霉素半数抑制浓度(IC50)及MCF-7/ADR细胞的耐药倍数。耐药倍数= MCF-7/ADR细胞 IC50/MCF-7细胞IC50。
2.2.3MTT测定LY294002对MCF-7/ADR的逆转作用将两种细胞各分为对照组(MCF-7+阿霉素,MCF-7/ADR +阿霉素)、实验组(MCF-7+LY294002 +阿霉素,MCF-7/ADR +LY294002 +阿霉素)、空白组。LY294002取第一步筛选的无细胞毒性浓度范围内取值分别为0 ......
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