PPAR激动剂罗格列酮对人子宫肌瘤细胞的影响(2)
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1.2.3 形态学观察 用倒置显微镜进行细胞自然生长状态的观察和不同浓度罗格列酮作用于细胞后细胞的形态学变化。
1.2.4 MTT 实验测定细胞生长抑制率 呈对数生长期细胞使用胰蛋白酶消化,制成1×105/mL 单细胞悬液,接种96 孔培养板,每孔100μL(即1×104个细胞),置37℃、5% CO2温箱中培养,24h 后倒置显微镜观察细胞已贴壁生长,分别加入不同浓度罗格列酮,继续培养24、48、72h,实验终止前4h 加入10 MTT 溶液(5mg/mL)20μL,37℃继续孵育4h,中止培养,吸去孔内上清液,每孔加入DMSO 150μL,振荡10min,用酶标仪在490nm 处测定各孔的吸光度A 值。实验设药物处理组、细胞对照组和空白对照组,每种处理重复3 次。罗格列酮终质量浓度分别为10-6、10-7、10-8mol/L。按下列公式计算肿瘤细胞增殖抑制率:肿瘤细胞增殖抑制率(%)=1 -(A 药物处理组-A 空白对照组)/(A 细胞对照组-A 空白对照组)×100%。实验重复3 次,取平均值。
1.2.5 细胞总RNA 的提取和目的片段的扩增 取生长状态稳定,呈对数生长期细胞加入不同浓度罗格列酮,72h 后加入适量Triol,将细胞收入EP 管中。此实验分为空白组、肌瘤加药组(单纯加入罗格列酮,终浓度为10-6、10-7、10-8mol/L),用RNA 提取试剂盒分别提取各组总mRNA 并立即逆转录为cDNA。以10μg 总cDNA 为模板,用上述3对PCR 引物和GAPDH 通用引物分别扩增各个目的片段。产物经琼脂糖凝胶电泳后用图像分析仪进行半定量分析,以各个目的片段与GAPDH 的比值作为其mRNA 的相对表达量。实验重复3 次,取平均值。
1.3 统计学处理
数据用均数±标准差(χ±s)表示,组间差异采用单因素方差分析;两两比较采用SNK-q 检验;用SPSS13.0 统计软件系统进行数据分析。
2 结果
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