抗sHLA-Ⅰ免疫磁珠的制备与鉴定
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1.4.2 抗HLA单克隆抗体W6/32的共价偶联 加入20μg生物配体到上述离心管中，用BST溶液调节总体积至500μL，轻柔混匀磁珠和生物配体；37℃偶联至少3h，该期间保持磁珠的悬浮状态；离心管置于磁分离架上进行磁分离，移除上清，加入1mL BST(含1% BSA)重悬磁珠，置于恒温振荡培养箱中37℃活化30min，进行混匀；离心管置于磁分离架上分离磁珠，移除上清，磁珠用500μL BST洗涤4次；磁分离，移除上清，磁珠用1mL BST(含0.02%NaN3，0.5%BSA)重悬，保存于4℃。
1.4.3 流式细胞仪鉴定免疫磁珠包被效果取100μL偶联好的免疫磁珠，以FITC标记的羊抗鼠二抗进行标记，置于恒温振荡培养箱中37℃孵育30min，离心管置于磁分离架上进行磁分离，PBS洗涤2次，以500μL PBS重悬，流式细胞仪鉴定免疫磁珠包被效果。
1.4.4 免疫磁珠吸附去除效果评价储存血样本12000r/min离心5min，留取一部分血浆采用ELISA检测去吸附前sHLA-Ⅰ含量。再取500μL的血浆，加入50μL制备的偶联好的免疫磁珠，置于恒温振荡培养箱中37℃孵育30min，离心管置于磁分离架上进行磁分离，ELISA检测吸附后sHLA-Ⅰ浓度，操作过程按试剂盒说明进行。
1.5 统计学分析
样本均数采用(χ±s)表示，样本间比较采用t检验，统计分析采用SPSS13.0软件处理。
2结果
2.1 免疫磁珠偶联效果
见图1。图1结果显示采用上述方法制备的抗sHLA-Ⅰ免疫磁珠的抗体包被效率约为75%。
2.2 免疫磁珠吸附效果评价
ELISA检测吸附前后储存血血浆中sHLA-Ⅰ浓度比较见表1。表1显示，贮存红细胞RBC和机采血小板PLT经免疫磁珠吸附前后血浆部分中sHLA-I含量比较有显著性差异(P<0.05)。
3讨论
同种异体输血造成受血者免疫功能抑制[2]，导致肿瘤复发率和术后感染率增高的机制目前尚不清楚，但大量的研究表明供血者的白细胞在其中起着相当关键的作用。临床研究发现，输注用滤网去除白细胞的同种异体血液可以显著降低受血者的死亡率，减少输血后发热和抗生素的应用，并且同自体输血所造成的术后感染率和肿瘤复发率无统计学差异[3]。另一些学者[4]研究表明单纯输注去除白膜的红细胞的患者术后感染率与输注全血的患者术后感染率无统计学差异，提示血液中的其他成分中也可引起受血者免疫功能抑制。
Gluo[5]研究发现储存30d的红细胞悬液和随机采集的血小板中的可溶性HLA-1 (sHLA-I)类分子浓度显著高于其他血液成分中的sHLA-Ⅰ分子浓度。sHLA-Ⅰ类分子可以与CD8+CTL细胞膜表面的TCR结合，阻碍了TCR特异性识别靶细胞膜上的sHLA-Ⅰ类分子——抗原复合物，从而阻碍了CTL的活化；sHLA-Ⅰ类分子还可能阻碍活化的CTL与靶细胞结合发挥效应[6-7]。
临床输注血液中sHLA-Ⅰ分子主要是储存过程中从白细胞表面脱落下来的，成分输血中血小板上清中的sHLA-Ⅰ则是由血小板降解所产生的。考虑到当前的血液制品减白技术并不能完全去除白细胞，目前我国采用的储存后(dockable filtration)减白法无法减少sHLA-Ⅰ分子等可溶性分子的产生，即使在储存前(in-line或dockable filtration)减白因为血液制品中血小板的降解也无法避免sHLA-Ⅰ分子的产生；因此如何去除血液制品中sHLA-Ⅰ分子就成为当前输血后免疫抑制研究中所面临的关键问题。本研究采用抗HLA单克隆抗体W6/32制备的免疫磁珠能够有效地吸附去除红细胞悬液和机采血小板中的可溶性HLA分子，在改善临床输血安全方面有着广阔的应用前景。
[参考文献]
[1] Ghio M，Contini P，Mazzei C，et al. Soluble HLA class I and Fas ligand molecμLes in blood components and their role in the immunomodμLatory effects of blood transfusions[J]. Leuk Lymphoma，2000，39(1-2)：29-36.
[2] Hebert PC，Fergusson D，Blajchman MA，et al. Clinical outcome following institution of the Canadian universal leukoreduction program for red blood cell transfusions[J]. JAMA，2003，289(15)：1993-1995.
[3] Chelemer SB，Prato BS，Cox PM Jr，et al. Association of bacterial infection and red blood cell transfusion after coronary artery bypass surgery[J]. Ann Thorac Surg ......
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