薯蓣皂苷元对人宫颈癌细胞增殖的影响(2)
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1.7 统计学处理
所有实验重复3次以上，采用SPSS13.0统计软件包进行统计分析，计量资料用均数±标准差(χ±s)表示，组间均数比较采用方差分析与t检验。检验水平α=0.05。
2 结果
2.1 MTT结果
20μmol/L薯蓣皂苷元作用24h后，开始明显抑制宫颈癌Hela的细胞活力(P<0.05)，呈现量效和时效的影响，随着薯蓣皂苷元浓度增加和作用时间的延长，抑制效果明显增强。根据MTT结果和参考文献，选用25μmol/L浓度的薯蓣皂苷元进行以下实验。见图1。
图1 不同浓度薯蓣皂苷元对人宫颈癌细胞株Hela细胞活力的影响
2.2 EdU结果
EdU阳性细胞数(即增殖期细胞)在薯蓣皂苷元处理6h和12h后明显减少；作用12h EdU阳性细胞数减少更明显。见图2。
2.3 流式细胞仪检测细胞周期
25μmol/L薯蓣皂苷元阻滞细胞在G0/G1期，S期细胞减少(P<0.05)；G2/M期细胞没有明显变化。作用24h和48h，两者之间无明显差异。见表1。
2.4 Western blot检测结果
25μmol/L薯蓣皂苷元作用6h后对Cyclin D1蛋白水平无明显影响；作用12h后降低Cyclin D1蛋白的水平；Cyclin B1蛋白水平无明显变化。见图3。
图3 薯蓣皂苷元对细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin B1的影响
3 讨论
子宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤，传统的治疗方案认为宫颈癌对化疗药物不敏感，仅在晚期和复发患者中将化疗作为综合治疗一部分。近年来大量基础和临床研究表明，化疗在宫颈癌的治疗中，对局部治疗手段不能控制的肿瘤周围、肉眼看不到的微小转移灶以及可能存在的全身亚临床转移有一定疗效，进而确定化疗在治疗宫颈癌的地位。化疗药物通过抑制肿瘤细胞增殖和诱导凋亡起到抗肿瘤作用，因此寻找新的抑制宫颈癌细胞增殖或诱导凋亡的药物，成为治疗宫颈癌的新策略。
国外研究表明薯蓣皂苷元具有显著抗增殖和诱导凋亡作用。体内抗肿瘤的效用方面，Malisetty等[3]报道在啮齿动物结肠癌模型中，薯蓣皂苷元在起始、始发、进程中能够抑制结肠癌前病变，表明它可以有效推迟和终止结肠癌前病变的出现和发展。Raju等[4]研究也证实，薯蓣皂苷元阻止结肠癌变早期阶段的进程。此外，体外抗肿瘤效用方面，Shishodia等[5]检测体外的薯蓣皂苷元对60种人类肿瘤细胞系/株的细胞毒作用，结果显示薯蓣皂苷元的细胞毒作用可对抗NCI人类肿瘤的白血病、实体瘤等大多数细胞株。MTT结果提示薯蓣皂苷元抑制宫颈癌Hela细胞活力，15μmol/L薯蓣皂苷元作用24h后不能明显抑制细胞活力，20μmol/L薯蓣皂苷元作用24h开始明显抑制宫颈癌Hela的细胞活力，随着浓度增加抑制作用更加明显，呈现量效和时效作用；根据MTT和其他文献结果，采用25μM薯蓣皂苷元进行EdU实验及下一步实验，进一步证明其抑制宫颈癌Hela细胞株增殖的作用。
Cyclin D1在G1/S期转换过程中起重要作用，是细胞DNA合成以及通过G1/S期检测点的正向调控因子；Cyclin B1是典型G2/M期周期蛋白，促进细胞从G2期进入M期完成有丝分裂。研究结果表明薯蓣皂苷元阻滞细胞G0/G1期，减少S期细胞；25μmol/L薯蓣皂苷元作用6h对Cyclin D1蛋白水平无明显影响，作用12h和48h后Cyclin D1蛋白水平降低；薯蓣皂苷元对Cyclin B1蛋白水平影响无明显差异，与相关文献报道一致。
综上所述，薯蓣皂苷元能抑制宫颈癌Hela细胞株增殖，通过降低Cyclin D1蛋白表达而引起G0/G1期细胞阻滞，薯蓣皂苷元抑制增殖作用有明显的量效和时效影响。遗憾的是，由于时间所限制没有进行相关细胞信号通路的研究，我们将在下一步实验，重点研究薯蓣皂苷元影响宫颈癌Hela细胞株的信号通路。
[参考文献]
[1] McAnuff MA，Harding WW，Omoruyi FO，et al. Hypoglycemic effects of steroidal sapogenins isolated from Jamaican bitter yam. Dioscorea polygonoides[J]. Food Chem Toxicol，2005，43(11)：1667-1672.
[2] Turchan-Cholewo J，Liu Y，Gartner S，et al. Increased vulnerability of ApoE4 neurons to HIV proteins and opiates： protection by diosgenin and L-deprenyl[J] ......
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