褪黑素对SAP大鼠肾损伤的保护作用及机制研究(2)
 |
| 第1页 |
参见附件(2045KB，2页)。
1.2.3 病理学检测 处死大鼠胰腺及肾组织用10%甲醛固定、石蜡切片、HE染色，光镜下观察其病理学改变。参考雷文章等[5]标准对肾组织病理损害评分。
1.2.4 肾组织细胞凋亡指数检测 各组大鼠肾组织石蜡切片采用TUNEL法检测细胞凋亡指数，光镜观察肾脏凋亡细胞，胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞，于阳性表达分布区域、每片光镜(10×40)视野下随机选择5个无重叠视野，计数阳性细胞，以凋亡阳性细胞数占总细胞数的百分比作为细胞凋亡指数。
1.3 统计学处理
使用SPSS14.0软件进行统计学分析。计量资料用均数±标准差(χ±s)表示，组间比较用单因素方差分析，相关性用多元线性回归分析，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 胰腺、肾组织病理学变化
光镜下观察：N组各时点胰腺、肾组织结构完整。S组造模后12h胰腺小叶内和小叶外周局灶性坏死，间质内炎细胞浸润，肾小球毛细血管瘀血；24h时胰腺腺泡极度肿胀、出血，可见片状坏死；肾组织可见散在坏死、蛋白管型，间质大量炎细胞浸润；48h时胰腺多处片状坏死，部分腺叶正常结构消失，肾小球囊内可见嗜伊红染色的絮状物和红细胞，肾小管内亦可见嗜伊红染色的均质管型或红细胞管型，小部分大鼠肾小管上皮细胞呈片状坏死。M组各时间点肾脏病理改变均较SAP组减轻，病理评分见表1。
2.2 血清学指标分析
S、M组大鼠血清淀粉酶(AMY)、肌酐(Cr)、MDA值随造模时间延长逐渐上升。S组(12h、24h、48h)与N组同时间点AMY、Cr、MDA值比较显著升高(P<0.01)，M组(12h、24h、48h)与S组同时间比较明显降低(P<0.05)。见表1。
2.3 凋亡指数的变化
见表2。
2.4 相关性分析
S组中MDA含量与血清Cr、肾细胞凋亡指数均呈正相关(r分别为0.807，0.607，P<0.05)，M组中MDA含量与血清Cr、肾细胞凋亡指数均呈正相关(r分别为0.826，0.721，P<0.05)。
3 讨论
胰源性肾功能障碍是导致SAP患者死亡的重要因素之一，发展至急性肾衰后病死率可达80%[6]，其机制尚未完全明确。本实验中，模型大鼠胰腺及肾组织间质炎细胞浸润、出血、坏死，后期组织结构不清且程度随时间延长逐渐加重；S组各时段肾组织病理损害评分及血清AMY、Cr值明显高于N组(P<0.05)。
MDA是脂质过氧化作用的最终分解产物，其变化可以反映脂质过氧化程度。本实验研究发现随SAP大鼠造模时间延长，S组MDA含量逐渐增多，明显高于同时段N组(P<0.01)；通过相关性分析发现血清Cr值与MDA含量呈正相关(P<0.05)，说明脂质过氧化对SAP时肾脏功能的损害是存在的。细胞凋亡是由生理或病理因素引起的细胞程序性死亡方式，是机体维持自身稳定的一种基本生理机制。本实验研究发现S组肾脏细胞凋亡指数随造模时间延长逐渐升高，明显高于N组同时间段指标(P<0.01)；且S、M组中肾细胞凋亡指数与MDA均呈正相关(P<0.05)，说明SAP发展中脂质过氧化与肾脏细胞凋亡存在密切关系。脂质过氧化介导细胞凋亡的机制目前尚未完全清楚，可能与脂质过氧化引起细胞内Ca2+释放增加、GSH的耗尽等因素有关，Ca2+能激活促使细胞凋亡的各个信号转导途径。
褪黑素是松果体腺分泌的一种吲哚类激素，能有效清除氧自由基，通过调节细胞因子抑制炎症发生发展[7]，其受体广泛存在于免疫器官、大脑、甲状腺、胃肠道、肾脏、胰腺B细胞。近年来，国外部分研究[8，9]认为褪黑素能影响胰腺组织脂质过氧化程度，修复炎症后胰腺组织。本实验中M组大鼠各项检测指标与S组同时段相比较：肾脏病理损伤减轻(P<0.05)；血清AMY、Cr、MDA下降(P<0.05)；肾细胞凋亡指数降低(P<0.05)。说明褪黑素在SAP疾病发展中具有抗氧化的功能，并可能通过抗脂质过氧化、抑制细胞凋亡从而达到改善肾脏功能的作用，其抗氧化机制不明，可能与其结构稳定、能增强抗氧化酶活力及基因表达、产生具有强大自由基清除效能的代谢产物等因素相关。
综上所述，脂质过氧化引起细胞凋亡对SAP时肾损害的影响不容忽视。褪黑素所具有的高效抗氧化性是谷胱甘肽的4倍，维生素E的2倍[10]，而且它具有脂溶性和水溶性双重性质，极易透过各种生理屏障到达体内任何部位发挥药理作用。如能在SAP早期应用褪黑素，无疑对干预炎症发生进展和防治肾功损害具有积极作用。
[参考文献]
[1] 刘宝，潘爱军，邵敏，等.重症急性胰腺炎早期并发多脏器功能障碍综合征的危险因素分析[J].中华急诊医学杂志，2006，15(2)：110.
[2] Col C，Dinler K，Hasdemir O，et al.Exogenous melatonin treatment reduces hepatocyte damage in rats with experimental acute pancreatitis[J].Hepatobiliary Pancreat Sci，2010，17：682-687.
[3] 董乐妹.褪黑素干预急性坏死性胰腺炎肺损害及巨噬细胞移动抑制因子表达[J].中国临床药理学与治疗学，2009，14(3)：261-264.
[4] 杨元生，崔淑兰，陈垦，等.重症急性胰腺炎实验动物模型的研究进展[J]. 世界华人消化杂志，2009，17(25)：2601-2606.
[5] 雷文章，韦靖江，沈文律，等.实验性坏死性胰腺炎多器官损害与内毒素血症的关系[J].中华实验外科杂志，1995，12(3)：131-132.
[6] Pupelis G.Renal failure in acute pancreatitis. Timing of dialysis and surgery[J].przegl Lek ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(2045KB，2页)。