1.2 主动脉内皮细胞的培养与鉴定

    颈椎脱臼处死SD雌性大鼠，碘伏酒精消毒后，逐层剖开胸腹腔，于脊柱旁暴露主动脉，游离主动脉周围筋膜及结缔组织，分离后取主动脉弓至髂总动脉段，剪下放入无菌PBS液中漂洗去除附壁血细胞后，放入1640培养液中，使用眼科镊将主动脉内膜翻转朝外，并剪成1～2 mm宽动脉环，平均摆放入25 cm2培养瓶中，37 ℃、5%CO2培养箱中静置1 h后，加入配制好的大鼠专用内皮细胞培养液(RPMI1640、20%胎牛血清、大鼠内皮生长因子、肝素、青链霉素)，静置68 h以上。每3天更换培养液一次，待细胞生长单层融合后，0.25%胰酶消化传代，实验使用3～5代细胞。采用形态学、倒置显微镜及抗CD31抗体免疫组化染色法行内皮细胞鉴定。

    1.3 实验分组

    试验共设置7组：(1)游离脂肪酸干预组设3组：以去脂牛血清白蛋白(d-BSA)为溶解软脂酸的载体，以加入培养液中软脂酸浓度的不同分为200 μmol/L、400 μmol/L、600 μmol/L(各组载体d-BSA含量为0.2%、0.4%、0.6%)；(2)葡萄糖干预组，30 mmol/L GLU；(3)联合培养组：30 mmol/L GLU + 400 μmol/L PA；(4)对照组：①正常培养液组(含5.5mmol/L GLU)，②0.5% d-BSA+正常培养液组。

    1.4 形态学观察

    以每孔1×104个细胞接种于6孔板中 ......