对人结肠癌细胞株HT-29转染shRNA重组质粒后Survivin基因变化的研究
结肠癌HT-,SiRNA,RT-PCR,Western-blot
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参见附件。
袁禧先 张爽 徐宗云 王凤荣 董慧慧 佳木斯大学附属第一医院消化二科;佳木斯大学临床医学院;
【摘要】目的通过对人结肠癌细胞株HT-29转染shRNA重组质粒后观察Survivin基因的变化。方法设计两条针对Survivin基因CDS区不同位点的siRNA片段并构建shRNA表达载体,重组质粒使用阳离子脂质体法转染结肠癌细胞株HT-29。RT-PCR,Western-blot检测转染后mRNA及蛋白表达。结果转染shRNA重组质粒可有效抑制HT-29细胞Survivin的表达,Survivin mRNA和蛋白表达下调,表明Survivin基因沉默效果较高;两个转染组之间相比pshRNA1组Survivin基因的表达量低于pshRNA2组。结论人结肠癌细胞株中的Survivin基因表达率可通过shRNA重组质粒转染而发生变化;siRNA1和siRNA2序列中Survivin基因表达量存在统计学意义,提示我们在今后有关Survivin基因靶向治疗研究中是否需要考虑到序列的选择以提高作用效果。
【关键词】 Survivin 结肠癌HT- SiRNA RT-PCR Western-blot
【基金】黑龙江省2011年研究生创新科研资金项目(YJSCX2011-380HLJ)
【分类号】R735.35
大肠癌是消化道常见的恶性肿瘤,其发生发展受很多因素的影响,其中细胞凋亡的抑制和过度增殖是主要的因素之一[1]。1998年RNA干扰(RNA interference,RNAi)由Fire A首次报道至今,RNAi技术以其高效、特异等优势,取得了显著的基因沉默效果,成为了研究基因功能的新手段。Survivin
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[摘要] 目的 通过对人结肠癌细胞株HT-29转染shRNA重组质粒后观察Survivin基因的变化。 方法 设计两条针对Survivin基因CDS区不同位点的siRNA片段并构建shRNA表达载体,重组质粒使用阳离子脂质体法转染结肠癌细胞株HT-29。RT-PCR,Western-blot检测转染后mRNA及蛋白表达。 结果 转染shRNA重组质粒可有效抑制HT-29细胞Survivin的表达,Survivin mRNA和蛋白表达下调,表明Survivin基因沉默效果较高;两个转染组之间相比pshRNA1组Survivin基因的表达量低于pshRNA2组。 结论 人结肠癌细胞株中的Survivin基因表达率可通过shRNA重组质粒转染而发生变化;siRNA1和siRNA2序列中Survivin基因表达量存在统计学意义,提示我们在今后有关Survivin基因靶向治疗研究中是否需要考虑到序列的选择以提高作用效果。
[关键词] Survivin;结肠癌HT-29;SiRNA;RT-PCR;Western-blot
[中图分类号] R730.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2012)15-0001-03
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