3031例血流感染病原菌分离情况及耐药性分析(2)
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参见附件。
1材料与方法
1.1 菌株来源
我院2009年8月～2011年7月住院门诊患者采集的血培养标本3 031例，其中需氧培养1 531例，厌氧培养1 500例。
1.2 仪器与试剂
血培养瓶、BACT/ALERT 3D60全自动血培养仪及真菌鉴定药敏API条由法国生物梅里埃公司提供。西门子MicroScan WalkAway40全自动细菌鉴定仪进行一般细菌鉴定及药敏分析，药敏纸片为英国Oxoid公司产品。念珠菌显色培养基为郑州博赛生物有限公司产品。质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922，金黄色葡萄球菌ATCC25923，铜绿假单胞菌ATCC27853。
1.3 方法
1.3.1 标本采集 患者在高热、寒战时或抗菌药物使用前采集血液8～10 mL，注入血培养专用瓶，混匀后立即送检。基本采用单侧双瓶采集。
1.3.2 细菌分离及鉴定药敏 自动血培养仪报警提示阳性时移种至血平板、巧克力平板、麦康凯平板，必要时移种至真菌显色培养基中进行细菌分离，并同时进行革兰染色镜检，将镜检结果初报给临床医生。若培养5 d未报警则报告“经5天培养无细菌及真菌生长”。分离到单个菌落采用西门子MicroScan WalkAway40全自动细菌鉴定药敏仪进行细菌鉴定及药敏。K—B法药敏试验按照NCCLS进行操作和结果判断。真菌鉴定用20C AUX API条，药敏试验用ATB—fungus3药敏API条。
1.3.3 耐甲氧西林葡萄球菌检测 应用30 μg头孢西丁药敏纸片替代1 μg苯唑西林，按NCCLS标准判定。
1.4 统计学方法
以WHO NET 5.4进行数据分析，同一患者的相同菌株以首次分离菌进行统计。
2 结果
2.1 病原菌分布及构成比
从3 031份血培养标本中分离出病原菌268株，阳性率8.84%，其中G+菌152株，占56.7%，其中凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)88株，占32.8%(主要为表皮葡萄球菌32株，占CNS36.4%；人葡萄球菌人亚种30株，占CNS 34.1%)；金黄色葡萄球菌15株，肠球菌16株，链球菌4株，构成比分别为5.6%、6.0%、1.5%。G—菌98株，占36.6%，其中大肠埃希菌40株，鲍曼不动杆菌14株，肺炎克雷伯菌10株，构成比分别为15.0%、5.2%、3.7%。真菌18株，占6.7%，其中热带念珠菌7株，乳酒假丝酵母4株，光滑球拟酵母3株，构成比分别为2.6%、1.5%、1.1%。
2.2 病原菌的耐药情况
革兰阳性球菌及革兰阴性杆菌对常用抗菌药物的耐药率见表1、2。
3讨论
我院2009年8月～2011年7月住院和门诊患者共送检3 031份血培养标本，分离出268株病原菌，阳性率为8.84%，与郭燕[2]报道10.43%的阳性率基本一致，而比张淑青等[3]报道的16.3%低，可能与地域不同或临床用药差异有关，前两者为浙江地区，而后者则为华北地区。本资料中革兰阳性球菌分离率要高于革兰阴性杆菌分离率，而且革兰阳性球菌中又以凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)高居首位，占32.8%，而且绝大部分是耐甲氧西林的CNS。凝固酶阴性葡萄球菌分离率占首位可能因为临床上各种免疫抑制剂和广谱抗菌药物的广泛应用，使各种条件致病菌成为血行感染的重要致病菌[4]。CNS中居前两位的是表皮葡萄球菌，占CNS 36.4%，人葡人亚种占CNS 34.1%。表葡已成为临床重要机会致病菌和院内感染的重要致病菌，这已是不争的事实；而人葡萄球菌近年来也已成为临床常见致病菌，特别是长期卧床免疫力低下的患者更容易发生感染。故对从血培养中分离出的凝固酶阴性葡萄球菌，应鉴别到种的水平，并同时进行抗菌药物敏感性试验，为临床感染治疗提供实验室依据[5]。本资料显示，耐甲氧西林的金葡菌(MRSA)检出率60%，与陈坚等[6]报道的MRSA检出率64%基本一致；耐甲氧西林的凝固酶阴性葡萄球菌(MRSN)检出率80%以上。对现在的临床用药带来很大困难。且许多研究证明，CNS有比较高的污染率，因此，临床医生应结合多方面因素如体温、白细胞计数、病史以及抽血时的皮肤消毒效果等等来考虑此细菌是否为真正的病原菌。检出的葡萄球菌对奎奴普丁/达福普丁、万古霉素、利奈唑胺的敏感性为100%，但也应注意合理使用与监测.肠球菌的耐药情况还不算太严重。
本次资料中，革兰阴性杆菌检出主要以大肠埃希菌为主，占G—杆菌的五成左右，其次是鲍曼不动杆菌和肺炎克雷伯菌，与国内许多报道基本一致。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对β—内酰胺类药物耐药率较高，可能与其产ESBLs有密切关系；其次对喹诺酮类抗生素也有60%以上的耐药率，与医院长期滥用这类药物有一定关系；对碳青霉烯类药物及阿米卡星敏感性最高，可作为首选药物。真菌检出率不高，占6.7%，尽管检出率不高，但主要分布在ICU和呼吸内科等重点科室，应引起临床医生足够重视。
血培养仪阳性报警时间的早晚对临床治疗有非常重要的影响。本资料显示仪器阳性报警在12h之内的有82株细菌，12～24 h有105株细菌，24 h之内报警阳性187株，占78.6%，且12h内同一株兼性厌氧菌厌氧培养比需氧培养阳性报警稍早，说明血培养一次抽两瓶是非常有必要的，至少可以快速预报阳性及提高阳性检出率。 血培养细菌阳性报警时间与总体细菌浓度有关，而后者又与接种菌量相关。而在实际操作中，所有研究对象的血培养接种量不可能完全一致，故对实验结果有一定影响[7]。因此，若有条件，临床抽取血培养最好是双侧多套，且增加抽血次数，这样对提高阳性率，减少污染率有很大帮助。总之，我们要积极配合临床治疗，减少败血症的发生。
[参考文献]
[1] 罗小铭，欧萍，陈菊香. 961份血培养的细菌及其药敏分析[J]. 中国微生物学杂志，1997，9(2)：35—36 ......
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