胰十二指肠切除术后肠黏膜屏障损伤及SIRS与肠道细菌移位的关系(2)
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参见附件。
1资料与方法
1.1一般资料
选择2011年2～12月我院行择期胰十二指肠切除术患者50例，男29例，女21例，年龄33～69岁，平均(47.83±11.35)岁，排除术前存在严重免疫系统疾病、全身性疾病、重要脏器功能障碍及并发症患者。所有患者均顺利完成胰十二指肠切除术，术后观察全身炎症反应综合征(SIRS)及并发症。另选50例健康者作为空白对照组，男30例，女20例，年龄30～70岁，平均(45.94±12.43)岁。两组比较一般资料之间差异无统计学意义(P > 0.05)，有可比性。
1.2方法
1.2.1标本取样 空白对照组于检验日清晨，患者于术前及术后24、48、72 h在无菌条件下抽取空腹外周静脉血10 mL置于无菌的乙二胺四乙酸二钠抗凝管，于4℃采用2 000 r/min，离心10 min，分装成1.5 mL试管于—80℃存储备检。
1.2.2 试剂与仪器 右旋乳酸脱氢酶、D—乳酸检测试剂盒购自美国Sigma公司；Biospin全血基因组DNA提取试剂盒，PCR扩增试剂盒购自北京博迈斯生物科技有限公司；内毒素测定试剂盒购自北京博迈斯生物科技有限公司；德国Eppendorf紫外可见光分光光度计；德国Eppendorf 5804R离心机。
1.2.3实验室检测 所有受试者全血标本采用酶学分光光度法检测血浆D—乳酸，标准曲线范围：(3.125～50)mg/L；采用鲎实验法测定血浆内毒素。
1.2.4全血微生物DNA提取 以大肠杆菌特异性β半乳糖苷酶基因的BG—1、BG—4及细菌共有的16S rRNA基因的16S rRNA+、16S rRNA﹣为靶基因。BG—1引物序列为：5’—CTTTGCCTGGTTTCCGGCACCAGAA—3’(201—225)；BG—4引物序列为：5’—AACCACCGCACGATAGAGATTCGGG—3’(963～939)；16S rRNA+引物序列为：5’—GGACTACCAGGGTATCTAAT—3’(806—787)；16S rRNA﹣引物序列为：5’—GGACTACCAGGGTATCTAAT—3’(484～504)，进行PCR扩增。
1.3诊断标准[4]
SIRS诊断：术后体温>38℃；心率>90次/min；呼吸>20次/min，PaCO2<32 mm Hg；白细胞计数<4×109/L或>12.0×109/L或未成熟粒细胞>10%。具备以上2项或2项以上者可诊断为SIRS。
1.4统计学处理
数据采用SPSS 17.0进行统计学分析，计数资料采用χ2检验，计量资料以均数±标准差(x±s)表示，采用t检验或方差分析，直线相关性采用Pearson直线系数分析，P < 0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1血浆D—乳酸和内毒素的关系
空白对照组与病例组术前血浆D—乳酸和内毒素水平差异无统计学意义(P > 0.05)，病例组术后各时段血浆D—乳酸和内毒素均显著高于术前，手术24 h最高，后呈下降趋势(P < 0.05)，胰十二指肠切除术后患者血浆D—乳酸和内毒素呈正相关(r = 0.823，P < 0.05)，胰十二指肠切除术后存在明显的肠道细菌移位情况，见表1。
2.2 细菌DNA PCR检测结果
术前所有患者细菌DNA PCR结果均为阴性，术后72 h内PCR检测阳性10例(20.00%)，其中24、48、72 h 分别为4例次、8例次、8例次，各时段均检出BG和16S rRNA阳性，BG略低于16S rRNA。术后SIRS 17例(34.00%)，其中PCR阳性8例，占47.06%，无SIRS感染患者33例，其中PCR阳性2例，占6.06%，两组差异有统计学意义(χ2=12.845，P < 0.01)，见表2。
表2 胰十二指肠切除术全血细菌DNA PCR检测结果
注：与无SIRS组比较具有统计学意义(χ2=12.845，*P < 0.01)
2.3细菌DNA PCR及SIRS与血浆D—乳酸和内毒素的关系
PCR阳性组血浆D—乳酸和内毒素显著高于PCR阴性组(P < 0.01)，SIRS组血浆D—乳酸和内毒素显著高于无SIRS组(P < 0.01)，PCR阳性、SIRS与胰十二指肠切除术后肠黏膜屏障损伤密切相关，见表3。
表3 患者细菌DNA PCR及SIRS与血浆D—乳酸和内毒素的关系(x±s)
注：t1为PCR阳性组和PCR阴性组比较；t2为SIRS组与无SIRS组比较
3讨论
肠道手术会导致肠道失血，肠绒毛缺血、缺氧而形成缺血性损害，再灌注后大量的前列环素、前列腺素、白三烯等血管因子会使肠道微血管频繁收缩和舒张，氧自由基、C反应蛋白等因子会导致血管内皮损伤，从而使肠道血管功能受损、通透性增加[2—4]。此外，分泌型IgA功能受到抑制，进一步损伤肠黏膜屏障功能，使肠道免疫防御能力下降。肠道内定植细菌透过受损的肠上皮细胞或血管上皮细胞转移至肠周围组织、肠黏膜深处形成肠细菌移位，肠道手术为之提供了有利条件 ......
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