香菇多糖氯化钠注射液中香菇多糖含量测定的研究(2)
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2.3精密度试验
取新配制的蒽酮硫酸溶液4 mL于试管中，置冰浴中，沿管壁缓缓加入供试品溶液2 mL，使分层，立即剧烈振摇，摇匀，置沸水浴中加热6 min，取出，立即置冰浴中冷却2 min，取出，摇匀，室温放置10 min，照紫外-可见分光光度法在625 nm波长处测定吸收度，重复测定6次，见表1。试验结果表明，RSD = 0.87% < 2.0%，可以满足含量测定的要求。
表1 精密度试验结果
2.4 重复性试验
取本品6瓶，分别浓缩至约20 mL，分别加水分次转移至50 mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀；照上述测定方法测定，见表2。试验结果表明，RSD = 1.29% < 2.0%，能满足本品含量测定的要求。
表2 重复性试验结果
2.5线性关系试验
精密称取干燥至恒重的香菇多糖对照品20.3 mg，加0.5 mol/L氢氧化钠溶液10 mL，研磨，使溶解，加水分次转移至500 mL容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀(相对于含量测定浓度的200%)；分别精密量取上述溶液加水稀释制成含量测定浓度的50%、80%、100%、120%、150%，在冰浴条件下，分别精密量取上述溶液各2 mL，沿管壁缓缓加至已精密加入蒽酮硫酸溶液4 mL的试管中，使分层，立即剧烈振摇，摇匀，置沸水浴中加热6 min，取出，立即置冰浴中冷却2 min，取出，摇匀，室温放置10 min，照紫外-可见分光光度法以水为空白，在625 nm的波长处测定吸光度分别为0.181 6、0.294 2、0.371 5、0.440 6、0.552 7。
试验结果表明，香菇多糖在含量测定浓度的50%～150%范围内，吸光度与浓度呈现良好的线性关系(r = 0.999 9)，可满足含量测定的要求。
2.6回收率试验
取干燥至恒重的香菇多糖对照品约8 mg、10 mg、12 mg(注：每个称三份)，加0.5 mol/L氢氧化钠溶液10 mL，研磨，使溶解，分别加水分次转移至已加入工艺比例混合的空白辅料的500 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。按(2.1.2)方法测定本品的回收率，见表3。实验结果表明：选定的含量测定法平均回收率为99.66%，回收率均在98.0%～102.0%范围，RSD = 1.04% < 2.0%，结果良好，可以满足含量测定的要求。
表3 回收率试验结果
3讨论
实验结果表明，实验方法的重现性非常理想，蒽酮-硫酸法测定香菇多糖氯化钠注射液在(10.15～30.45) μg/mL范围内呈良好线性关系(r = 0.999 9)，精密度RSD = 0.87%(n = 6)，平均回收率为99.66%，RSD = 1.04%(n = 9)。经以上方法学考察认为，蒽酮-硫酸法测定香菇多糖氯化钠注射液中香菇多糖的含量较稳定、可靠。
3.1 香菇多糖含量测定方法的选择
本实验主要成果是成功地运用蒽酮-硫酸法测定出香菇多糖氯化钠注射液中香菇多糖的含量。
3.2 减少误差的方法
为了减少含量测定中存在的误差，在样品浓缩过程中应注意溶液暴沸及样品的析出，由于浓硫酸遇水放热，可能导致水解等一系列的反应迅速进行，因此选择较大的反应容器(25 mL纳氏比色管)，并于冰水浴中加入后缓缓摇匀的操作，使置沸水浴中之前反应的发生尽可能小；同时要严格控制实验过程中加热时间是6 min，因为实验发现6 min是其反应的最高点，时间过短或太长都会影响测定结果。
3.3 反应灵敏度的影响
因样品中含有其他可能消耗碱性硫酸铜试剂的物质，而蒽酮-硫酸法所用的显色剂有特异性，仅与样品中特定的物质反应， 具有较高的灵敏度[4]。
3.4 供试品溶液浓度高低的选择
紫外-可见分光光度法测定供试品溶液的吸光度读数以0.3～0.7之间的误差较小，因此我们配制供试品溶液时要确保其吸光度在这个范围内。
通过实验的研究和总结 ......
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