小鼠cyclinA2正义和反义真核表达载体的构建及鉴定
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[摘要] 目的 构建小鼠cyclin A2的正义和反义真核表达载体。 方法 采用小鼠胚胎组织取材，提取总RNA。设计引物，采用RT-PCR方法扩增小鼠cyclin A2 mRNA得到cyclin A2的DNA，将此DNA插入pGEM-T载体，转化入JM109感受态细菌。将鉴定得到的重组质粒进行扩增，EcoRⅠ酶切后，回收cyclin A2目的片段亚克隆入pcDNA3.1真核表达载体。酶切筛选鉴定重组的真核表达载体pcDNA3.1-cyclin A2。 结果 将小鼠基因的开放阅读框(ORF)重组到真核表达载体pcDNA3.1内，用EcoRⅠ酶切重组质粒后可得到一接近1660 bp的DNA条带，核酸测序证实和GenBank所公布序列相符。HindⅢ酶切鉴定重组质粒后，证明分别为正向和反向插入载体的质粒。DNA测序证明构建的真核表达载体pcDNA3.1-cyclin A2的序列是正确的。 结论 成功构建了小鼠cyclin A2的正义和反义真核表达载体。
[关键词] 细胞周期蛋白A2；正义；反义；真核表达载体
[中图分类号] R346 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2012)31-0001-03
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