衢州地区宫颈病变患者HPV感染分子流行病学分析(1)
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[摘要] 目的 分析衢州地区1 280例宫颈病变女性中人乳头瘤病毒(human papillomavirus， HPV)21种基因型的分子流行病学特点。方法 对衢州地区1 280例宫颈病变的女性进行21种HPV基因型分型检测，比较不同基因型的流行病学特点。 结果 本组病例中总HPV感染率为55.31%(708/1280)，其中HR-HPV感染率为38.83%，LR-HPV感染率为16.48%，高危型最常见类型为HPV 16、58、52，低危型最常见类型为HPV6、11。HR-HPV亚型中16、58、52是主要的独立影响因素，而LR-HPV亚型中6、11是主要的影响因素。HPV单一型感染率11.1%，两种亚型合并感染率42.9%，三种亚型合并感染率30.6%，四种及以上亚型合并感染率15.4%。不同年龄段感染HPV及感染HR-HPV的比例均有显著性差异，最高为31～40岁组，分别占67.39%和50.58%，其次为21～30岁组，分别占61.75%和45.78%，HPV感染与宫颈病变程度呈正相关。 结论 本研究提供了衢州地区宫颈病变女性的21种HPV基因型分子流行病学资料，为本地区宫颈癌的临床防治工作提供了可靠的科学依据，对本地区今后疫苗的开发、应用也具有重要价值。
[关键词] HPV；基因型；高危型；宫颈病变
[中图分类号] R737.33 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701(2012)32-0011-03
宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤，流行病学调查和分子生物学研究均已证实人乳头瘤病毒(HPV)感染是引起宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的主要原因，其中高危型HPV(HR-HPV)感染被认为是引起宫颈癌的最重要因素[1]。目前已发现的HPV亚型共有100多种，但能从被感染生殖道中分离出的亚型仅30多种[2]， 不同种族、不同地区、不同的研究人群其感染的HPV亚型分布也有所不同[3]。衢州市因地属浙西山区，女性宫颈病变的发病率一直较高，已严重影响到本地区女性的生殖健康和生命安全，因此，我们对本地区宫颈病变的女性进行HPV感染分子流行病学调查，旨在为本地区HPV感染防治措施的制度以及今后HPV疫苗的使用提供依据，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
2009年1月～2010年12月间来我院妇科门诊就诊时自愿做TCT宫颈疾病筛查的患者共17 578例，其中1 280例患者TCT诊断为不能明确意义的非典型鳞状上皮细胞(ASCUS)及以上，对该部分患者均进行了HPV病毒检测，并在阴道镜下行多点活检组织病理学确诊，同时行相关流行病学调查分析。该组患者年龄 27～56岁，平均(43.8±21.4)岁，最终经病理确诊为炎症846例、湿疣104例、CINⅠ237例、CINⅡ和Ⅲ共92例、鳞癌1例。
1.2 试剂和仪器
采用香港凯普生物科技有限公司生产的HPV核酸扩增分型检测试剂盒(包括DNA提取试剂盒、PCR扩增试剂盒及杂交试剂盒)和医用核酸分子快速杂交仪，美国ABI公司生产的ABI2720普通扩增仪和Beckman公司生产的DU 800紫外分光光度仪，同时对21种HPV亚型(包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68等15种高危亚型以及6、11、42、43、44、CP8304等6种低危亚型)进行检测。
1.3 实验方法
1.3.1 标本采集及保存 用棉拭子轻轻擦净宫颈口分泌物，再将专用拭子插入宫颈管内，顺时针旋转4～5周以获取足够的上皮细胞样本，取出后将其置入内有专用细胞保存液的取样管中，将宫颈刷柄折断，旋紧瓶盖，做好样品编号及登记，4℃保存并于1周内检测。
1.3.2 PCR扩增及杂交检测 ①DNA提取：吸取标本保存液0.5 mL，离心1 min(14 000 r/min)后弃上清液，剩余标本用DNA试剂盒随带的提取液进行HPV-DNA提取。②PCR扩增：在ABI 2720扩增仪中进行PCR扩增，采用HPV通用引物，引物序列5’端带生物素标记。扩增过程：20℃ 10 min (UNG酶作用)、95℃ 9 min(预变性)、95℃ 20 s(变性)、55℃ 30 s(退火)、72℃ 30 s(延伸)，共进行40个循环后行72℃ 5 min(再延伸)。③杂交：在医用核酸分子快速杂交仪中进行杂交，具体操作按杂交试剂盒说明书进行。
1.4 结果判断[4]
杂交膜共设24个点，Biotin和IC设为对照点，当两点均为阳性则提示检测结果可信，两点全部或其中之一阴性均提示检测结果不可信；当对照点正常时，其他点出现蓝紫色圆点时其对应的HPV亚型判定为阳性。任何一种HPV亚型阳性均判定为HPV感染，其中两种或以上HPV亚型阳性均判定为HPV复合感染 ......
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