7株不同原核质粒表达丙型肝炎核心蛋白的差异研究
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汪明珊 颜学兵 周林福 李杨霞 浙江省人民医院感染科;徐州医学院附属医院感染病科;浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所;
【摘要】目的通过比较不同原核质粒表达丙型肝炎核心蛋白(CORE)的差异,筛选出能高效表达CORE的原核质粒。方法用PCR扩增并获得CORE基因,扩增产物分别构建到7种不同原核表达质粒中,重组质粒用IPTG诱导表达,聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)初步鉴定表达产物,并经Western blot验证。结果 PCR及双酶切验证表明CORE基因成功构建到7种原核质粒中,SDS-PAGE验证各融合质粒表达目的蛋白存在差异,其中pTrc-CKS-CORE及Pmbp-C-CORE可见相应的融合蛋白表达,以pTrc-CKS-CORE表达量高,表达产物经Western blot验证表达成功。结论成功构建7株不同CORE原核表达质粒,各融合质粒表达CORE存在较大差异,筛选出高表达CORE质粒,为下一步研究奠定基础。
【关键词】 丙型 肝炎病毒核心蛋白 质粒构建
【基金】江苏省自然科学基金(BK2007031)
【分类号】R373
丙型肝炎病毒(HCV)感染是世界范围内的重大难题,70%HCV感染者会导致慢性持续感染,严重者导致肝硬化(LC)及肝细胞癌(HCC)的发生[1]。HCV属黄病毒科,其中CORE为病毒的核衣壳蛋白,主要位于细胞质中,在慢性肝炎、肝硬化及肝细胞癌的致病过程中起到重要作用[1,2]。HCV感染人体后,
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[摘要] 目的 通过比较不同原核质粒表达丙型肝炎核心蛋白(CORE)的差异，筛选出能高效表达CORE的原核质粒。方法 用PCR扩增并获得CORE基因，扩增产物分别构建到7种不同原核表达质粒中，重组质粒用IPTG诱导表达，聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)初步鉴定表达产物，并经Western blot验证。 结果 PCR及双酶切验证表明CORE基因成功构建到7种原核质粒中，SDS-PAGE验证各融合质粒表达目的蛋白存在差异，其中pTrc-CKS-CORE及Pmbp-C-CORE可见相应的融合蛋白表达，以pTrc-CKS-CORE表达量高，表达产物经Western blot验证表达成功。 结论 成功构建7株不同CORE原核表达质粒，各融合质粒表达CORE存在较大差异，筛选出高表达CORE质粒，为下一步研究奠定基础。
[关键词] 丙型；肝炎病毒核心蛋白；质粒构建
[中图分类号] R512.6 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2012)33-0009-04
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