XAGE—1bmRNA在肝癌患者血液中的表达(1)
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[摘要] 目的 探讨原发性肝癌外周血液中XAGE-1b mRNA的表达意义。 方法 采集86例原发性肝癌患者静脉血，实时荧光定量PCR检测其中XAGE-1b mRNA的表达。 结果 原发性肝癌患者血液中XAGE-1b mRNA检出率为80.8%。 结论 XAGE-1b mRNA可作为一种肿瘤标志物诊断原发性肝癌。
[关键词] 肝癌；XAGE-1bmRNA
[中图分类号] R735.7 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701(2012)36-0038-02
CT抗原是一类在除睾丸、胎盘等以外的正常组织中几乎不表达的抗原，但可在多种肿瘤组织中表达。XAGE-1是通过生物信息学技术发现的一种新的CT抗原，且具有类似CT抗原的特性[1]。研究发现在肺癌、黑色素瘤、前列前癌等癌组织中均有较高的XAGE-1检出率，并且揭示了XAGE-1的表达与肿瘤亚型间的关联[2]。本研究采用实时荧光定量PCR(reak-time PCR)检测了原发肝癌患者静脉血中XAGE-1b mRNA的表达，并对其表达的意义进行探讨，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
收集我院2006年8月～2011年5月接受原发性肝癌切除术的患者86例，其中男 71例。女 15例，年龄30～69岁。所有患者均经病理组织学证实，其中肝细胞癌79例，胆管细胞癌7例，大肝癌49例，小肝癌37例，甲胎蛋白(AFP)阳性62例，阴性24例。
1.2 实验方法
术前采集患者周围静脉血2 mL，乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝，4℃保存。6h内抽提血液总RNA。使用QLAamp RNA Blood Mini试剂盒(德国QLAGEN公司生产)处理血液样本并提取样本中的RNA，以12%琼脂糖凝胶电泳抽样检验其质量。提取出RNA后使用反转录试剂盒(立陶宛Fermentas公司)制备cDNA，以cDNA为模板进行PCR反应，反应在Ftc2000荧光定量PCR仪(上海枫岭生物科技有限公司)上进行。总反应体系20 μL，其中探针(20 mmol/L)0.5 μL，引物(20 mmol/L)0.9 μL，Mix10 μL(PCR试剂盒，日本Toyobo公司)，血液样品cDNA2 μL，H20补至20 μL，每个样品的目的基因与内参基因各设3个重复实验。反应条件为94℃预变性60 s，94℃变性30 s，60℃退火，延伸及读板60 s，共进行40个循环。以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)作为内参基因。XAGE-1b上游引物5’-GCTGAAAGTCGGGATCCTACA-3’，下游引物5’-CTTCCATGTCGCGCACTG-3’，探针5’(TET)-CTGGGCAGC-AGACAG-3’(MGB)；GAPDH上游引物5’-GGGCTGCTTT-TAACTCTGGTAAAG-3’，下游引物5’-CCATGGGTGGAATCATATTGG-3’，探针5’(FAM)-CCTCAACTACATGGTTAC-3’(MGB)。每次反应均设置空白对照组及用于绘制标准曲线的6个梯度的标准样品反应混合物，标准样品反应混合物由复旦大学病毒与分子免疫学实验室制备提供。PCR反应结束后，仪器电脑软件自动生成以标准样品基因拷贝数的对数值为纵坐标，以各拷贝数对应的ct值为横坐标的标准坐标曲线，XAGE-1b及GAPDH的拷贝数均有各自的标准曲线，ct值取3次重复实验的算术平均值，以各自样本的XAGE-1b拷贝数与GAPDH拷贝数的比值来表示XAGE-1b的表达水平。甲胎蛋白检查方法采用实验室电化学发光方法。
1.3 统计学方法
应用SAS 6.12统计学软件，采用χ2检验或秩和检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 XAGE-1b的表达与患者性别、年龄的关系
男性患者的标准表达率为80.8%，女性患者的标准表达率为78.4%，两者之间差异无统计学意义(χ2=0.222，P > 0.05)，30～39岁组(29例，阳性26例)、40～59岁组(27例，阳性21例)和60岁以上组(30例，阳性25例)表达率分别为90.0℅、77.8%和83.3%，差异无统计学意义(χ2=1.535，P > 0.05)。
2.2 XAGE-1b mRNA的表达量与临床病理因素之间的关系
XAGE-1b mRNA的表达量在大肝癌与小肝癌之间、肝细胞癌与胆管细胞癌之间的差异无相关性，其表达与肿瘤大小、病理类型、疾病进展无相关性(P > 0.05)。
2.3 XAGE-1b mRNA的表达水平与AFP的关系
检测结果提示，XAGE-1b mRNA的检出率明显高于AFP的检出率(80.8% vs 72 ......
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