HO—1对肺气肿大鼠ICAM—1、MIP—2表达的影响(2)
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1.2 动物分组与造模
8周龄健康雄性Wistar大鼠18只，适应性饲养两周，随机分为3组，每组各6只：①正常未暴露组(对照组)；②烟雾暴露组(模型组)，将大鼠放入自制的玻璃箱中，每日用点燃的猴王牌香烟(焦油11 mg/支)熏约10 min，掀开箱盖休息5 min，重复烟雾暴露，每日2次上述烟雾暴露，每周5 d，连续20周；③Hemin+烟雾暴露组(干预组)，在每周首次烟雾暴露前24 h开始腹腔注射Hemin 25 μmol/kg，连续3 d，而对照组和模型组均用等毫升生理盐水腹腔注射。20周时同时处死3组实验动物取材做相关检测。
1.3 BALF的白细胞计数及分类计数
实验动物用戊巴比妥麻醉固定，处死，开胸，游离出双肺及气管，结扎右主支气管，用5 mL注射器从气管下部注入生理盐水3 mL反复灌洗3次，回收率在80%以上。使用毛细吸管吸取新鲜制备混匀的 BALF，在显微镜下行白细胞计数。剩余的BALF立即在4℃下离心(2000 rpm，8 min)，离心后取沉渣物涂片，采用瑞氏染色法按细胞形态学行细胞分类计数。
1.4 肺组织标本制作
取大鼠右肺上叶肺组织，置于10%甲醛液中固定，石蜡包埋后行HE染色，并行病理形态学观察和免疫组化检测。取右肺下叶肺组织，研磨成匀浆，行酶联免疫吸附试验检测。
1.5 肺组织中HO-1和ICAM-1的检测
用免疫组化SP法检测肺组织HO-1表达水平的变化，采用SABC法检测支气管肺组织ICAM-1表达水平的变化，操作步骤按试剂盒说明书进行。阴性对照标本以PBS缓冲液作为一抗 ......
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