β—catenin蛋白敲除对肺成纤维细胞活性影响的实验研究(2)
各组细胞每孔加入500 μL TRIzol Reagent,按试剂盒说明提取总RNA及行RT-PCR检测α-SMA、colⅠ、col Ⅲ表达,GAPDH为内参。GAPDH引物序列:上游引物5ˊ- GGTGCTGAGTATGTCGTGGAGT -3ˊ下游引物5ˊ- CAGTCTTCTGAGTGGCAGTGAT -3,α -SMA上游引物5ˊ- AGCCAGTCGCCATCAGGAAC -3ˊ下游引物5ˊ- GGGAGCATCATCCCAGCAA-3ˊ,colⅠ:上游引物 5ˊ- GACATGTTCAGCTTTGTGTACCTC -3ˊ下游引物5ˊ- GGGACCCTTAGGCCATTGTGA -3ˊcol Ⅲ:上游引物5ˊ- TTTGGCACAGCAGTCCAATGTA -3ˊ下游引物5ˊ- GACAGATCCCGAGTTCGCAGA -3ˊ。PCR 反应体系条件: 95℃ 20 s;95℃ 3 s,60℃ 30 s。40个循环。由随机附带软件计算出Ct值和拷贝数。
1.7 统计学方法
计量资料采用均数±标准差表示,数据处理采用SPSS 19.0软件进行t检验或方差分析 ......
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