骨桥蛋白促进SKOV3卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭能力(2)

http://www.100md.com 2014年12月25日 徐邱鸿等

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    参见附件。

     1 材料与方法

    1.1 药品与试剂

    OPN(4264，Sigma)、anti-OPN(ab91655，Abcam)、AKT(9272，cell signaling technology)、p-AKT(9271，cell signaling technology)、MMP2(ab110186，Abcam)，GAPDH(上海威奥生物)、辣根过氧化物酶标记羊抗兔二抗(碧云天)、PI3K抑制剂(LY294002， Cell Signaling Technology)、OPN ELISA Kit(上海信然生物)，DMEM高糖培养液(吉诺生物)、澳洲牛血清(Biosun)，PBS(吉诺生物)、0.25%胰酶-EDTA(吉诺生物)、吉姆萨染液(南京建成生物公司)、CCK8 Kit(碧云天)、RIPA、PMSF、磷酸酶抑制剂及蛋白酶抑制剂、BCA蛋白浓度测定试剂盒、蛋白印迹配胶试剂盒(碧云天)。

    1.2 细胞株

    SKOV3卵巢癌细胞株及IOSE80人正常卵巢上皮细胞购于上海斯信生物。

    1.3 细胞培养上清液收集

    接种培养细胞至覆盖约85%～90%，PBS洗3遍，无血清DMEM培养12 h。取培养液，于-20℃保存。

    1.4 细胞增殖测定

    按4×103个/mL将单细胞悬液0.1 mL接种至96孔板，加入不同浓度的OPN培养液(20、50、80、110 ng/mL)培养 ......

    http://www.100md.com/html/paper/1673-9701/2014/36/01-1.htm

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