妇科手术快速冷冻切片最佳冷冻时间的探寻及制片体会(2)
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参见附件。
1.3 方法
1.3.1 冰冻切片的制备及固定 开启冷冻切片机，使其环境温度固定在-22℃，冷冻头-22℃，组织托头表面放少许OCT包埋剂，放于切片机内备用。规定取材医生所取组织块的大小分别为：乳腺2.0 cm×1.5 cm×0.1 cm，子宫颈2.0 cm×0.5 cm×0.1 cm，子宫内膜(含肌壁)2.0 cm×1.5 cm×0.2 cm，卵巢囊壁2.0 cm×0.5 cm，致密结缔组织2.0 cm×1.5 cm×0.1 cm，疏松结缔组织2.0 cm ×1.5 cm×0.2 cm，平滑肌2.0 cm×1.5 cm×0.1 cm，脂肪1.5 cm×1.0 cm×0.1 cm，将取材医生切好的组织块放于冷冻头上，再用OCT包埋剂裹住组织，放于切片机内让其自然冷却。组织冷冻2 min左右时(冷冻刚完全，此时组织中心已开始由红变白)切片一张，立即放于甲醇固定液中固定，加2 min后再切片一张，同上固定，加5 min后再切片一张，同上固定。以上切片均固定30 s，厚度均为4 μm，然后均执行常规H.E染色。剩余组织放于4%中性缓冲甲醛液中固定3 h，再放于70%酒精中保存，待常规取材时再统一脱水制作成石蜡切片。
1.3.2 H.E染色 将已固定的切片用水冲洗后，放入预至50℃左右的苏木素染色液中染0.5～1.0 min，取出水洗数秒，用体积分数1%盐酸乙醇分化，水洗后放入40℃～60℃热水中蓝化。然后置入(5～10)g/L伊红液染10 s，水洗。体积分数80%～100%梯度乙醇脱水至二甲苯，封固[4]。以上各道酒精及二甲苯中，玻片均震荡数次，显微镜下对其观察。
1.4 质量评价标准
质量等级分三级：A级：组织结构清晰 ......
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