1.2.3 肽段的分离及鉴定 分别进行强阳离子交换层析分级分离、毛细管高效液相色谱分离、ESI质谱鉴定。

    1.3 数据分析及处理

    (1)质谱数据分析：原始文件用iTRAQ Result Multiple File Distiller分析定量数据，并用Sequest软件鉴定多肽分子。定量方法采用Identified iTRAQ Statistic Builder软件分析，依据同位素报告基因的相对含量进行蛋白质定量。(2)生物信息学分析：分析差异蛋白在Gene Ontology数据库中的分布状况，利用Cluster软件进行蛋白功能注释，基于KEGG数据库对差异蛋白基因进行通路注释，得到差异蛋白基因所参与的所有的通路，利用Fisher精确检验计算每个通路的显著性水平，并对多重假设检验的结果进行校正并获得误判率，从而筛选出差异基因参与的显著通路[3]。

    2 结果

    2.1 绝经前后的TNBC患者差异蛋白显著性功能分析

    绝经前在已鉴定的差异量2倍以上的214种蛋白中，具有Go注释的有89种，其中12种蛋白参与小分子代谢，10种蛋白参与细胞粘附，7种参与炎症反应，7种参与调节基因表达。见封三图1。绝经后已鉴定的差异量2倍以上的360种蛋白中 ......