靶向VEGF—C的siRNA表达载体对人乳腺癌细胞VEGF—C基因表达的影响(2)
1 材料与方法1.1 一般材料
实验研究时间:2013年4月~2014年12月。MCF-7人乳腺癌细胞株购自上海生博生物医药科技有限公司。靶向VEGF-C的siRNA真核表达质粒,阴性对照质粒。主要试剂:培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、脂质体LipofectamineTM 2000、Trizol试剂、RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit、2×Taq PCR Master Mix、DNA Marker Ⅱ、人VEGF-C ELISA试剂盒、SABC 组化试剂盒、DBA试剂盒、琼脂糖、DEPC等。主要仪器:CO2恒温培养箱、恒温水浴箱、核酸蛋白检测仪、离心机、电泳仪、电泳槽、PCR仪、酶标仪。
1.2 实验方法
1.2.1 细胞复苏、培养、传代 乳腺癌细胞株经复苏后,接种于培养瓶中,37℃,5%CO2恒温培养,细胞80%融合时,进行传代继续培养。
1.2.2 质粒转染细胞 (1)转染用重组质粒DNA纯化、定量 ......
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