转化生长因子β1和白细胞介素17与变应性结膜炎相关性研究(2)
1.2 仪器与试剂TGF-β1和 IL-17均采用酶联免疫吸附法(ELISA)进行检测。ELISA 检测试剂盒购置于晶美生物公司。严格按照试剂盒说明书进行操作。细胞因子单位为pg/mL。
1.3 方法
1.3.1 标本采集 实验组和对照组均常规采集外周静脉血8 mL,其中2 mL用于分离血清,-80℃冻存备用。6 mL用肝素抗凝,用于分离外周血单个核细胞。
1.3.2 TGF-β1和 IL-17检测方法 使用细胞裂解仪裂解实验组和对照组细胞后,将裂解液低温高速离心,分装上清液,-20℃保存。ELISA法检测血中TGF-β1和IL-17含量。具体操作按试剂盒说明书进行,具体步骤如下:①包被:每个反应孔中加0.1 mL用包被缓冲液稀释的抗体(该抗体的蛋白质含量为1~10 μg/mL),4℃过夜,次日用洗涤缓冲液洗涤3遍,每遍3 min。②加样:在上述已包被的反应孔中加一定稀释的上清液0.1 mL置37℃孵育1 h,然后洗涤,同时做对照组。③加酶标抗体:将稀释的酶标抗体0.1 mL加入各反应孔中 ......
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