脐血间充质干细胞移植对脑梗死大鼠的影响及作用机制(2)
1.2主要仪器与试剂免疫荧光显微镜,脑立体定位仪(NARISHIGE SN-3 型,日本)。
1.3 MSCs培养
取新鲜的脐血,淋巴细胞分离液提取单个核细胞,分装到2个50 mL培养瓶中,每瓶中加5 mL培养基,放于培养箱中培养,2~3 d后洗去没有贴壁的细胞并更换新鲜的培养液,以倒置显微镜观察细胞的生长状况。贴壁细胞完全融合以后,以2.5 g/L的胰酶消化并传代,把传至第2代的细胞接种在第2个6孔板内,每孔细胞浓度为1×105/mL,达到80%共融时再加入诱导剂。
1.4神经功能评分
Berderson评分标准:无神经损伤,0分;大鼠瘫痪侧前肢屈曲腹下,1分;除了1分体征外,瘫痪侧推大鼠阻力下降,2分;有追尾现象,3分。除上述体征外,大鼠活动量减少,4分。大鼠得分为0~4分。分别于术后6 h、24 h、3 d、7 d、14 d不同时间点对大鼠神经功能评分。2~4分者说明模型复制成功。选取2分以上的模型大鼠用于后续实验。
1.5免疫组化及免疫荧光
取大鼠脑组织 ......
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