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编号:12560359
微囊化胰岛素产生细胞的胰岛素释放情况观察(2)
http://www.100md.com 2015年5月25日 《中国现代医生》 2015年第15期
     1.3.2 诱导分化及鉴定 取出培养传代后的骨髓间充质干细胞加入50 mg/g的大鼠胰腺提取液,诱导分化1周后,一部分进行双硫腙检测,另一部分做细胞免疫荧光检测;双硫腙检测在原培养瓶内,加入双硫腙染色工作液(10 g/L),37℃,水浴10 min后,镜检[5];免疫荧光检测取分化后的细胞,离心、固定、PBS冲洗后,封闭1 h,加一抗(兔抗小鼠胰岛素抗体),室温孵育1 h,PBS冲洗,然后加二抗(FITC标记山羊抗兔IgG抗体)室温孵育1 h,镜检[6]。

    1.4 微囊化IPCs的制备

    将诱导以后的IPCs置于1.8%海藻酸钠溶液中,同时调节注射泵(70 mL/h)、气流的速度(5 L/min)、海藻酸钠浓度及液面的高度。使用气体微囊发生器,将含有IPCs的海藻酸钠溶液喷入100 mmol/L CaCl2溶液中,形成钙珠以后,用多聚赖氨酸包裹(浓度为0.05%),将其用生理盐水冲洗过后,再放入海藻酸钠溶液(浓度为0.14%)里,再经柠檬酸钠处理以后就获得了微囊化的IPCs ......
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