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编号:12560058
不同体外培养方法对去透明带小鼠胚胎发育的影响(2)
http://www.100md.com 2015年6月5日 《中国现代医生》 2015年第16期
     微滴单卵+群卵培养组:观察待微滴单卵培养方法体外培养出来的胚胎基本已经完全发育到8-细胞阶段,此时开始进行群体的培养,移动时使用移卵管,以减少胚胎的损伤。

    mWOW培养组:按照Pereira等[2]制作mWOW孔的方法,将针头加热后在35 mm无菌塑料培养皿上20个孔(孔深0.2 mm、直径0.3 mm左右),之后打完孔的培养皿用KSOM和DDW培养液洗涤使孔中的杂质清除。所有的mWOW孔先用400 μL KSOM培养液滴覆盖,然后KSOM培养液滴上再覆盖一层薄薄的石蜡油。待2 h后将每个mWOW孔里放置一枚合子,放于37℃、5%CO2培养箱中培养。

    本实验重复培养6次,随机将484枚合子(去透明带)分成四组;即微滴单卵组合子数为120枚、微滴群卵组合子数为124枚、微滴单卵+群卵组合子数为120枚、mWOW组合子数为120枚,四个组用相同的培养皿和培养液培养。2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑椹胚以及囊胚发育情况的检测时间,分别是在培养到20 h、40 h、52 h、64 h、88 h。取出的囊胚经过染色计算囊胚细胞数 ......
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