[摘要] 目的 建立鼠源性HSP70、GM-CSF双修饰前列腺癌全细胞疫苗。 方法 通过化学合成和PCR方法分别构建小鼠Hspa1a、Csf2基因片段，TA克隆入pMD-18T载体测序验证。上述合成好的目的序列通过限制性内切酶BamHI/AscI酶切、T4DNA连接酶连接，分别装入慢病毒表达载体pLenti6.3_MCS中，构建慢病毒重组载体pLenti6.3_MCS_Hspa1a_cMyc和pLenti6.3_MCS_Csf2_V5。载有重组载体pLenti6.3_MCS_Hspa1a_cMyc和pLenti6.3_MCS_Csf2_V5的慢病毒液分别对鼠前列腺癌细胞系RM-1进行稳定转染或共转染，Western blot检测蛋白表达，10 Gy放射线照射使其丧失增殖能力后冻存。 结果 测序验证重组慢病毒表达载体pLenti6.3_MCS_Hspa1a_cMyc和pLenti6.3_MCS_Csf2_V5构建成功。经293T细胞包装后分别或共转染RM-1，Western blot证实GM-CSF、sHSP70表达，GM-CSF和HSP70共表达。 结论 本实验成功建立了鼠HSP70、GM-CSF双修饰RM-1细胞全细胞疫苗 ......