1.6 免疫印迹

    将SH-SY5Y细胞以1×105/mL的细胞密度接种于6孔板中，培养24 h后，加入血竭素高氯酸盐，终浓度为0、20、40、80 μM，24 h后弃去上清，冷PBS漂洗1次，用细胞裂解液RIPA冰上裂解细胞后提取蛋白，1 mL一次性注射器吹打断裂DNA，收获蛋白后，15 000 g离心5 min，取上清加入Loading Buffer 100℃煮沸5 min后-40℃备用，同时取2 μL上清用于蛋白BCA试剂盒定量，根据蛋白定量结果，每个泳道加入25 μg蛋白进行SDS-PAGE凝胶电泳。转膜至PVDF膜，5%脱脂奶粉室温封闭1 h后，加入Caspase活化形式，p53，bcl-2，MAPK，以及周期相关蛋白等一抗4℃过夜。TBS-T漂洗3次，对应二抗室温1 h，TBS-T漂洗3次后，加入ECL发光液显色，拍照。

    1.7 统计学方法

    计量资料数据符合正态分布且方差齐性的表示为均数±标准差(means±SD)，独立两组间数据采用配对设计t检验进行比较，多组间比较使用单因素方差分析(one way ANOVA) ......