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编号:12875187
内毒素脂多糖(LPS)对人牙周膜成纤维细胞TNF—α、IL—6(2)
http://www.100md.com 2016年4月5日 《中国现代医生》 2016年第10期
     1.2 方法

    1.2.1 HPLFs的取材、体外分离和培养 选择2013年1月~2014年1月我院因阻生齿而行拔除术中分离的新鲜健康牙周膜组织,入选患者共12例,其中男7例,女5例,年龄范围18~28岁,无龋病、牙周病和根尖周病,3个月内未使用抗生素类、激素类药物,无糖尿病史、心血管病史、吸烟史等。将牙周膜组织在超净台内剪碎,应用含有100 U 双抗PBS 缓冲液进行冲洗,去除表面的凝血块及残留物质,用2 U/mL的Dispase Ⅱ 分散酶浸泡16~18 h,剥除牙周膜上皮组织,采用组织块法进行HPLFs的原代细胞培养,标准培养条件:37℃,950 mL/L空气,50 mL/L CO2,100%湿度,取第2~3代细胞进行实验。

    1.2.2 分组 将培养的HPLFs细胞以 5×105/孔密度接种于6孔板,加入适量DMEM培养液,培养至细胞生长达80%汇合后弃原培养液,对照组为不含LPS的20 mL/L胎牛血清DMEM,PBS缓冲液冲洗细胞2次,细胞用0.25%戊二醛固定。实验组加入预先配置的LPS ......
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