玻璃化冷冻技术在人类胚胎中的应用价值(2)
1.3 冷冻胚胎的标准参照文献[3]的卵裂期胚胎分级方法并结合本中心实际工作将D3胚胎分为4级:Ⅰ级胚胎卵裂球均匀,胚胎无碎片或有少量碎片(<5%);Ⅱ级胚胎卵裂球均匀,胚胎碎片<20%;Ⅲ级胚胎卵裂球均匀或不均匀,胚胎碎片<50%;Ⅳ级胚胎卵裂球均匀或不均匀,胚胎碎片≥50%。中心规定Ⅰ~Ⅲ级胚胎予以冷冻,Ⅳ级胚胎不予冷冻。囊胚冷冻标准为第5、6天发育到4BC或4BC以上的胚胎方可进行玻璃化冷冻。
1.4 玻璃化冷冻
在室温下(24℃)将1~2个胚胎移入平衡液中(equilibration solution,ES),预平衡6~7 min(卵裂期胚胎)/8~10 min(囊胚)后,再将ES中的胚胎移入玻璃化冷冻液(vitrification solution,VS),充分混匀后在60 s以内将胚胎迅速放置冷冻载杆(cryotop)顶端标记位置,并将载杆投入液氮装管保存。
1.5 玻璃化解冻
把冷冻载杆(cryotop)从液氮中取出,将顶端迅速放入37℃预热的解冻液(thawing solution,TS)中60 s,再将解冻后的胚胎依次移入稀释液(diluent solufion,DS)、洗液1(washing solution l,WS1)和洗液2(washing solution 2 ......
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