疟疾是由蚊子传播的一种寄生虫病，由带有疟原虫的雌性按蚊叮咬人体而传染，其已经成为全球热带、亚热带最严重的公共卫生问题之一[1]。疟疾主要有四种致病疟原虫：恶性疟(falciparum)、间日疟(vivax)、卵形疟(ovale)、三日疟(malariae)。随着我国对外开放程度的不断扩大，从疟疾流行区归来后引起疟疾爆发的报道次数逐渐增多，且近年来输入性病例所占比例不断增加[2]，各个省份均有报道，故对疟疾的控制计划是巨大的挑战。

    临床疟疾诊断和最常规的方法以镜检疟原虫、临床体征观察、抗原检测为主。但其准确性、灵敏度均有待提高。PCR检测外周血寄生虫的敏感性和特异性较好，且PCR方法在分型鉴定中有特殊优势。目前，PCR鉴定疟原虫方法大致有：巢氏PCR[3，4]、一步法单管多重PCR[5]、荧光PCR(SYBR Green)[6]、环介导等温扩增PCR(LAMP)。其中巢氏PCR扩增样本之后需要核酸胶鉴定[7]，溶解曲线判断要求不同种疟原虫的溶解温度差异要大。本研究旨在开发操作更简单、单步骤的多重PCR体系，在单管中能同时鉴定几种疟原虫的方法，现报道如下。

    1 材料与方法

    1.1仪器与试剂

    四种疟原虫阳性血样来自临床患者 ......