CD40基因单核苷酸多态性及其基因型与下肢动脉硬化闭塞症的相关性研究(2)
1.3研究方法
采用reverse transcription-PCR技术及DNA测序法检测目的基因的多态性。
1.3.1 RNA的提取 在调查对象全血中收集单个核细胞，采用改良酸性硫氰酸胍-酚-氯仿提取法(TRIzol法)提取单核细胞基因组RNA[5]，然后将提取的RNA逆转录成c-DNA保存于-80℃冰箱中备用。
1.3.2 引物的设计 采用primer premier5引物设计软件设计CD40基因rs1883832C/T基因序列的扩增引物。首先在NCBI的基因库中查找该基因的基因序列，复制序列至primer premier5软件，设置参数，引物长度一般设置成18～30 bp，扩增片段长度设置成100～600 bp。设计完成后采用Oligo 6.0软件对引物进行验证评估。
1.3.3 引物的合成 采用分子量标准引物定位合成法(marker primer-directed synthesis，MPDS)[6]合成以上软件设计的引物，其中，rs1883832C/T位点碱基的DNA片段正向引物序列为5’-GGACCTGGGGG-CAAAGAAGA-3’ ......
您现在查看是摘要页，全文长 4285 字符。
采用reverse transcription-PCR技术及DNA测序法检测目的基因的多态性。
1.3.1 RNA的提取 在调查对象全血中收集单个核细胞，采用改良酸性硫氰酸胍-酚-氯仿提取法(TRIzol法)提取单核细胞基因组RNA[5]，然后将提取的RNA逆转录成c-DNA保存于-80℃冰箱中备用。
1.3.2 引物的设计 采用primer premier5引物设计软件设计CD40基因rs1883832C/T基因序列的扩增引物。首先在NCBI的基因库中查找该基因的基因序列，复制序列至primer premier5软件，设置参数，引物长度一般设置成18～30 bp，扩增片段长度设置成100～600 bp。设计完成后采用Oligo 6.0软件对引物进行验证评估。
1.3.3 引物的合成 采用分子量标准引物定位合成法(marker primer-directed synthesis，MPDS)[6]合成以上软件设计的引物，其中，rs1883832C/T位点碱基的DNA片段正向引物序列为5’-GGACCTGGGGG-CAAAGAAGA-3’ ......
您现在查看是摘要页，全文长 4285 字符。