NLRP3炎性体与类风湿关节炎的相关性研究(2)
1.2.2 NLRP3、CASP1以及PYCARD基因检测 应用对照组以及研究组的cDNA建立30 μL的反应体系,实现PCR扩增,在-10℃条件下保存,扩增产物应用1%糖凝胶电泳进行检测,使用曝光机曝光拍摄PCR条带图像,应用软件测定灰度值,采用灰度值比表示mRNA的表达[4]。1.2.3 PCR产物的纯化以及测序 PCR产物在经过凝胶电泳纯化后,回收目的片段,将回收的目的基因再次凝胶电泳分析,核实存在条带后测定目的基因片段的核酸序列[5]。
1.2.4 NLRP3、CASP1以及PYCARD检测 收集两组研究对象外周血PBMCs,裂解60 min后,3000 r/min持续离心20 min并且收集上清。使用BCA法检测蛋白浓度,使用浓缩胶50 V以及分离胶80 V电泳,按照预染指示转移蛋白,使用脱脂牛奶进行封闭。封闭后用NLRP3、CASP1以及PYCARD抗体孵育过夜,使用TBST洗涤3次,10 min/次。孵育过氧化物酶标记羊抗兔IgG 1∶10000 ......
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