AQP3在上皮型卵巢癌细胞卡铂耐药中的作用(2)
1.4 Western blot检测E-Cadherin、Vimentin、AQP3蛋白水平RIPA裂解细胞,提取蛋白,使用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白,随后使用湿转法,将蛋白转到PVDF膜。之后封闭洗过,用E-Cadherin(CST,1∶1000)、Vimentin (CST,1∶1000)、AQP3(Abcam,1∶500)与GAPDH(CST,1∶2000)等一抗4℃过夜。取出膜,使用TBST液洗涤,再使用相应的二抗4℃孵育2 h。使用化学发光法检测印迹。使用Quantity One软件进行条带灰度定量。
1.5基因芯片
将细胞提取RNA送上海康成生物公司,使用Agilent表达谱基因芯片进行分析。
1.6统计学分析
计算和分析使用Graph Pad Prism 6软件,采用两个独立样本均数的t检验进行分析比较。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 卵巢癌细胞系在卡铂作用下发生EMT
首先检测在SKOV3与A2780两个卵巢癌细胞系中卡铂的IC50 ......
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