AQP3在上皮型卵巢癌细胞卡铂耐药中的作用(1)
[摘要] 目的 探索上皮型卵巢癌细胞卡铂耐药的机制，为提高卵巢癌患者化疗效果提供前期基础。 方法 应用CCK8方法检测卵巢癌细胞对卡铂的IC50浓度，用Western blot方法检测卡铂处理后细胞上皮间质化转变(EMT)蛋白E-Cadherin和Vimentin表达情况，使用siRNA敲降AQP3后再观察卡铂对其作用。 结果 卵巢癌细胞系SKOV3与A2780的卡铂IC50分别为2.814 μg/mL与1.516 μg/mL，同时发现卡铂能诱导卵巢癌细胞发生EMT，基因芯片结果显示水通道蛋白AQP3显著上调，进一步敲降AQP3基因后，能显著减弱卡铂诱导卵巢癌细胞产生EMT的效果。 结论 AQP3在卵巢癌细胞卡铂耐药机制中具有重要作用，降低AQP3的表达可以减弱卡铂诱导卵巢癌细胞上皮间质化转变的效果。
[关键词] 卵巢癌；卡铂；上皮间质化转变；水通道蛋白
[中圖分类号] R737.31 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2017)15-0027-03
[Abstract] Objective To discuss the mechanism of carboplatin resistance in epithelial ovarian cancer cells and to provide basis for improvement of chemotherapy effect in patients with ovarian cancer. Methods The IC50 concentration of ovarian cancer cells towards carboplatin was detected by CCK8， the expression of EMT proteins E-Cadherin and Vimentin after management of carboplatin was detected by Western blot， and the effect of carboplatin was observed again after AQP3 was knocked down by siRNA. Results The carboplatin IC50 was 2.814 μg/mL in SKOV3 ovarian cancer cell line and 1.516 μg/mL in A2780 line. Carboplatin could induce EMT in ovarian cancer cells. As to the result of gene chip， AQP3 was significantly up-regulated. When AQP3 gene was knocked down， EMT effect induced by carboplatin in ovarian cancer cells could be significantly reduced. Conclusion AQP3 has significant effect in the mechanisom of carboplatin resistance in ovarian cancer cells and reduction of the expression of AQP3 can reduce the EMT effect in ovarain cancer cells.
[Key words] Ovarian cancer； Carboplatin； Epithelial-mesenchymal transition； AQP
上皮型卵巢癌是女性生殖器最为常见的恶性肿瘤之一[1]，尽管近年来对卵巢癌的治疗，包括手术、放化疗及靶向治疗已经有了长足的进步，但卵巢癌患者预后仍较差，其中化疗耐药导致卵巢癌患者化疗效果差、早期复发转移是重要因素之一[2]。化疗在卵巢癌患者术后综合治疗中有着举足轻重的地位，铂类为基础的化疗方案是卵巢癌患者的一线治疗方案，但是大多数患者在经历了几个治疗疗程后会产生耐药，尤其是对常用的化疗药卡铂耐药[3]。因而为了进一步提高卵巢癌患者根治术后的生存率，提高现有化疗药物的疗效是治疗关键。但对卡铂化疗耐药更深入的机制仍不清楚，具有局限性，因而进一步研究卵巢癌内在调控化疗耐药的分子信号途径，寻找新的化疗药物，逆转现有的化疗耐药现状为我们制定新的卵巢癌治疗方针提供了重要思路。
水通道蛋白(Aquaporins，AQPs)广泛参与人体细胞内各种生理活动，在细胞膜上广泛分布，在哺乳动物中总共有13种AQP(AQP 0～12)[4]，而其中，AQP3被认为可以使细胞侵袭能力增强[5]，但是在卵巢癌中的研究尚属空白，基于此，本文观察AQP蛋白在卵巢癌中的作用，为进一步解决卡铂耐药奠定研究基础。
1 材料与方法
1.1 细胞培养
人卵巢癌细胞株A2780和SKOV3购自中国科学院上海生物科学研究院。使用RPMI-1640培养基，其中胎牛血清浓度为10%、1%青霉素/链霉素，均来自Gibco公司。细胞在37℃和5%CO2的条件下培养。
1.2 细胞活性检测
采用Dojindo公司CCK8试剂盒，检测细胞的活性。将细胞种在96孔培养板后，待细胞贴壁，分别加入指定的卡铂浓度，并培养48 h，加入CCK8试剂，并于490 nm处测OD值。
1.3 Real-time PCR 检测细胞AQP3的表达
分别提取对照组与卡铂组卵巢癌细胞的RNA，采用SYBR Premix Ex Taq Kit (TAKARA公司)进行Real-time PCR 检测AQP3的表达，将目的基因与内参基因的CT值比较(△CT)后，再将卡铂组与对照组比较(△△CT)。, 百拇医药(潘洁雪 叶龙云)
[关键词] 卵巢癌；卡铂；上皮间质化转变；水通道蛋白
[中圖分类号] R737.31 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2017)15-0027-03
[Abstract] Objective To discuss the mechanism of carboplatin resistance in epithelial ovarian cancer cells and to provide basis for improvement of chemotherapy effect in patients with ovarian cancer. Methods The IC50 concentration of ovarian cancer cells towards carboplatin was detected by CCK8， the expression of EMT proteins E-Cadherin and Vimentin after management of carboplatin was detected by Western blot， and the effect of carboplatin was observed again after AQP3 was knocked down by siRNA. Results The carboplatin IC50 was 2.814 μg/mL in SKOV3 ovarian cancer cell line and 1.516 μg/mL in A2780 line. Carboplatin could induce EMT in ovarian cancer cells. As to the result of gene chip， AQP3 was significantly up-regulated. When AQP3 gene was knocked down， EMT effect induced by carboplatin in ovarian cancer cells could be significantly reduced. Conclusion AQP3 has significant effect in the mechanisom of carboplatin resistance in ovarian cancer cells and reduction of the expression of AQP3 can reduce the EMT effect in ovarain cancer cells.
[Key words] Ovarian cancer； Carboplatin； Epithelial-mesenchymal transition； AQP
上皮型卵巢癌是女性生殖器最为常见的恶性肿瘤之一[1]，尽管近年来对卵巢癌的治疗，包括手术、放化疗及靶向治疗已经有了长足的进步，但卵巢癌患者预后仍较差，其中化疗耐药导致卵巢癌患者化疗效果差、早期复发转移是重要因素之一[2]。化疗在卵巢癌患者术后综合治疗中有着举足轻重的地位，铂类为基础的化疗方案是卵巢癌患者的一线治疗方案，但是大多数患者在经历了几个治疗疗程后会产生耐药，尤其是对常用的化疗药卡铂耐药[3]。因而为了进一步提高卵巢癌患者根治术后的生存率，提高现有化疗药物的疗效是治疗关键。但对卡铂化疗耐药更深入的机制仍不清楚，具有局限性，因而进一步研究卵巢癌内在调控化疗耐药的分子信号途径，寻找新的化疗药物，逆转现有的化疗耐药现状为我们制定新的卵巢癌治疗方针提供了重要思路。
水通道蛋白(Aquaporins，AQPs)广泛参与人体细胞内各种生理活动，在细胞膜上广泛分布，在哺乳动物中总共有13种AQP(AQP 0～12)[4]，而其中，AQP3被认为可以使细胞侵袭能力增强[5]，但是在卵巢癌中的研究尚属空白，基于此，本文观察AQP蛋白在卵巢癌中的作用，为进一步解决卡铂耐药奠定研究基础。
1 材料与方法
1.1 细胞培养
人卵巢癌细胞株A2780和SKOV3购自中国科学院上海生物科学研究院。使用RPMI-1640培养基，其中胎牛血清浓度为10%、1%青霉素/链霉素，均来自Gibco公司。细胞在37℃和5%CO2的条件下培养。
1.2 细胞活性检测
采用Dojindo公司CCK8试剂盒，检测细胞的活性。将细胞种在96孔培养板后，待细胞贴壁，分别加入指定的卡铂浓度，并培养48 h，加入CCK8试剂，并于490 nm处测OD值。
1.3 Real-time PCR 检测细胞AQP3的表达
分别提取对照组与卡铂组卵巢癌细胞的RNA，采用SYBR Premix Ex Taq Kit (TAKARA公司)进行Real-time PCR 检测AQP3的表达，将目的基因与内参基因的CT值比较(△CT)后，再将卡铂组与对照组比较(△△CT)。, 百拇医药(潘洁雪 叶龙云)